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離心機(jī)離心時(shí)間設(shè)定

詳情

離心時(shí)間的設(shè)定，是離心操作中極為關(guān)鍵的一步。設(shè)定合理的離心時(shí)間，能夠確保樣本充分分離、不過(guò)度沉淀、不被損傷。不同行業(yè)、不同樣本、不同離心目的，對(duì)時(shí)間的要求也不同。

下面，我將從通用原則、樣本類型參考、設(shè)備類型（如高速冷凍離心機(jī)）等角度，為你全面解析“離心時(shí)間設(shè)定”這一主題。

與離心力成反比關(guān)系
?離心時(shí)間并不是越長(zhǎng)越好。離心力（RCF，g）越高，離心時(shí)間可以越短。反之，低速離心通常需要延長(zhǎng)時(shí)間以達(dá)到分離效果。
避免過(guò)度離心
?時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致某些樣品損傷，比如細(xì)胞膜破裂、蛋白變性、樣本重懸困難。
樣本類型決定時(shí)間
?血液、細(xì)胞、蛋白、病毒、核酸、微粒等，其沉降速率差異極大，所需時(shí)間也完全不同。
設(shè)備性能也影響設(shè)定
?例如高速冷凍離心機(jī)在高轉(zhuǎn)速、恒溫環(huán)境下，通常能大幅縮短所需時(shí)間。

樣本類型	推薦離心力 (RCF)	推薦時(shí)間	溫度建議
全血分離血漿	1500–2000 ×g	10–15 分鐘	室溫或4℃
血清分離	2000–3000 ×g	10 分鐘	室溫或4℃
細(xì)胞收集（哺乳動(dòng)物細(xì)胞）	300–500 ×g	5–10 分鐘	4℃ 推薦
細(xì)胞核提取	600–1000 ×g	10 分鐘	4℃
蛋白沉淀（如TCA）	12000–15000 ×g	10–30 分鐘	4℃
DNA/RNA沉淀（乙醇沉淀）	12000 ×g	15–30 分鐘	4℃
微量PCR反應(yīng)液短暫下沉	1000 ×g	30–60 秒	室溫
病毒顆粒濃縮	25000–30000 ×g	2–4 小時(shí)	4℃（使用高速冷凍離心機(jī)）
外泌體提取	100000 ×g（超速）	60–120 分鐘	4℃（超速冷凍離心機(jī)）

注：這些值為推薦范圍，具體還需參考試劑盒說(shuō)明、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、管材尺寸與設(shè)備性能。

高速冷凍離心機(jī)由于具備：

可以在更短時(shí)間內(nèi)完成更高精度分離，同時(shí)保持樣本穩(wěn)定，特別適合高通量、高敏感度實(shí)驗(yàn)。

使用高速冷凍離心機(jī)時(shí)，建議按照廠家推薦時(shí)間縮短20~50%，但溫度建議仍保持在4℃以下。

確認(rèn)樣本屬性：液體種類、密度、體積、沉降目標(biāo)（血細(xì)胞？蛋白？DNA？）
選擇轉(zhuǎn)速或RCF：如果設(shè)備顯示轉(zhuǎn)速（rpm），需根據(jù)轉(zhuǎn)子半徑換算為RCF（g）
確定溫度：是否需要冷凍功能？是否啟用4℃運(yùn)行？
設(shè)定時(shí)間：參考實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)值、產(chǎn)品說(shuō)明或預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
試運(yùn)行優(yōu)化：初次使用建議進(jìn)行1次預(yù)實(shí)驗(yàn)，觀察沉降效果和樣本完整性
記錄時(shí)間參數(shù)：每種樣本離心參數(shù)應(yīng)記錄歸檔，方便后續(xù)復(fù)用

時(shí)間過(guò)短：樣本分離不徹底，出現(xiàn)上清混濁、沉淀不清、影響結(jié)果準(zhǔn)確性
時(shí)間過(guò)長(zhǎng)：細(xì)胞或顆粒沉降過(guò)緊，重懸困難，甚至破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致分析失敗
溫度配合不到位：導(dǎo)致蛋白降解、RNA斷裂、酶失活