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一、概述

熒光定量 PCR（Real-Time Quantitative PCR, qPCR）是現代分子生物學中應用最廣泛的核酸檢測技術之一。它將 PCR 擴增與熒光檢測系統結合，實現核酸擴增的實時監(jiān)測與定量分析。羅氏（Roche）作為全球知名的生命科學與體外診斷企業(yè)，其 LightCycler 系列 qPCR 儀以穩(wěn)定的性能、優(yōu)良的光學系統和數據處理能力聞名，長期應用于科研、臨床檢測、食品安全、環(huán)境監(jiān)測等多個領域。

對于預算有限或想快速擴充實驗室檢測能力的用戶，二手羅氏熒光定量 PCR 儀是一個性價比較高的選擇。特別是 LightCycler 480 II 和 LightCycler 96 兩款機型，在二手市場保有量大、配件易獲取、維護成熟，能夠覆蓋從高通量到中等通量的多種應用需求。

二、工作原理

羅氏 qPCR 系統的核心在于將熒光信號與核酸擴增同步檢測。每一次 PCR 循環(huán)結束時，光學模塊會通過特定波長的激發(fā)光照射反應體系，熒光染料或探針在與擴增產物結合后發(fā)射熒光。檢測器記錄信號強度的變化，并生成擴增曲線。

主要檢測方式包括：

1. 染料法（SYBR Green 等）
   與雙鏈 DNA 結合后發(fā)光，信號強度與產物數量成正比，適用于基因表達定量、拷貝數檢測等基礎研究。

2. 探針法（TaqMan、FRET 探針等）
   特異性更高，利用探針與目標序列的結合及酶切過程釋放熒光，實現高精度檢測，適用于臨床診斷、多重檢測和 SNP 分型。

羅氏 LightCycler 系列在光學系統設計上較為獨特，使用多通道濾光組，減少通道間干擾，提高檢測靈敏度，并在溫控均一性方面保持行業(yè)領先水平。

三、主要型號及特點

1. LightCycler 480 II

• 貨號：05015278001

• 通量與兼容性：可支持 96 孔板、384 孔板，以及多種特殊格式反應板，適合高通量檢測與大規(guī)模實驗項目。

• 光學系統：具備多波長檢測能力，支持多重熒光標記實驗，減少樣品用量的同時提高信息獲取效率。

• 溫控性能：溫度精確控制，孔間差異極小，保證擴增一致性。

• 應用場景：適合基因表達譜分析、大規(guī)模樣本篩查、臨床大通量病原體檢測等。

2. LightCycler 96

• 貨號：05815916001

• 通量與兼容性：固定 96 孔檢測平臺，可兼容標準 96 孔板或 8 聯管，通量適中。

• 用戶界面：操作簡潔直觀，配備彩色觸控屏，適合中小型實驗室快速上手。

• 性價比優(yōu)勢：結構緊湊，占用空間小，維護成本低，適合常規(guī)檢測與日?？蒲?。

• 應用場景：日?；蚨繖z測、教育培訓實驗室、小批量病原體檢測等。

四、核心技術優(yōu)勢

1. 溫控精準與均一性
   高速升降溫系統確保循環(huán)時間短、溫度控制精確，減少實驗時間并提升重復性。

2. 高靈敏度檢測
   光學信號采集系統可檢測極低濃度的核酸模板，部分應用可達到單拷貝級別靈敏度。

3. 多通道多重檢測
   支持多達 6 個熒光通道，實現一管內多靶標檢測，節(jié)省試劑與時間。

4. 軟件分析能力
   內置分析軟件可直接完成 Ct 值計算、標準曲線生成、相對定量、熔解曲線分析等，并可導出多種格式的報告。

5. 兼容性與擴展性
   兼容多種耗材與化學體系，易于與自動化加樣平臺、液體處理系統聯動，適配不同實驗規(guī)模。

五、二手設備采購價值

購買二手羅氏 qPCR 儀的優(yōu)勢主要體現在：

1. 成本優(yōu)勢
   二手設備價格通常為新品的 30%–60%，在保證性能的情況下顯著降低投入成本。

2. 性能依舊穩(wěn)定
   羅氏設備的設計壽命長，光學模塊與溫控系統耐用，即使使用多年仍可保持高精度。

3. 配件與耗材易獲得
   因保有量大，配件與耗材在市場上容易采購，且有成熟的維修服務渠道。

4. 適合快速擴建實驗室
   對于需要短時間內建立檢測能力的團隊，二手設備可立即部署投入使用。

六、典型應用領域

1. 基礎科研

• 基因表達譜分析

• 功能基因篩選

• 拷貝數變異研究

2. 臨床檢測

• 病原體定量檢測（病毒載量、細菌負荷等）

• 遺傳病基因檢測

• 腫瘤分子標志物分析

3. 食品與農業(yè)檢測

• 轉基因成分檢測

• 食品致病菌監(jiān)測

• 動植物疫病分子診斷

4. 環(huán)境監(jiān)測

• 水體微生物污染檢測

• 病原體環(huán)境溯源

七、使用與維護建議

1. 實驗前檢查
   確保樣品臺和光學模塊清潔，避免熒光信號干擾。

2. 溫控校準
   定期使用標準板進行溫控精度檢測和校準。

3. 耗材選擇
   使用與機型匹配的反應板、管和封膜，避免漏液和蒸發(fā)。

4. 軟件更新
   保持軟件版本更新，以獲得更穩(wěn)定的性能和更豐富的分析功能。

5. 存放與運輸
   二手設備運輸前需固定光學部件，防止震動損傷。

八、總結

二手羅氏 LightCycler 系列熒光定量 PCR 儀兼具高性能與高性價比，是科研與檢測實驗室的優(yōu)質選擇。LightCycler 480 II 更適合大規(guī)模、高通量、復雜多重檢測項目；而 LightCycler 96 則適合常規(guī)檢測、教學培訓及中小型實驗室日常應用。對于資金有限或需要快速部署的團隊，合理采購并維護二手設備，可以在較低成本下獲得與新機接近的檢測能力。