賽默飛Wellwash 1x8洗板機(jī)實(shí)驗(yàn)流程

一、前言

在ELISA及其他基于微孔板的免疫學(xué)、分子生物學(xué)與生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，洗板步驟直接關(guān)系到檢測(cè)的靈敏度和特異性。人工清洗往往因操作不均導(dǎo)致背景信號(hào)升高或結(jié)果偏差，而賽默飛Wellwash 1x8洗板機(jī)通過自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化的流程，實(shí)現(xiàn)了快速、均一、低殘留的清洗。本手冊(cè)旨在為用戶提供完整的實(shí)驗(yàn)流程說明，以便在實(shí)際操作中獲得穩(wěn)定、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段

1. 儀器檢查

• 電源確認(rèn)：確保接入AC 220V、接地良好的電源插座。

• 外觀檢查：確認(rèn)機(jī)身無破損，面板顯示正常。

• 液路確認(rèn)：洗液瓶、廢液瓶管路連接正確且無泄漏。

• 洗針檢查：8針排列整齊，無堵塞或彎曲。

2. 試劑與耗材準(zhǔn)備

• 洗液：常用PBS緩沖液或含Tween-20的洗液，根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案配制。

• 微孔板：標(biāo)準(zhǔn)96孔酶標(biāo)板，底型可為平底、圓底或V底。

• 廢液容器：容量≥2 L，帶液位報(bào)警傳感器。

• 吸水紙或擦拭紙：用于板底殘液去除。

3. 預(yù)沖洗

• 開機(jī)后，用蒸餾水運(yùn)行一次沖洗程序，排除管路中空氣與殘液。

三、實(shí)驗(yàn)流程

1. 裝載酶標(biāo)板

• 打開托盤，將待洗酶標(biāo)板放置在固定槽中，確保方向正確、孔位居中。

• 關(guān)閉托盤，等待系統(tǒng)自動(dòng)定位。

2. 參數(shù)設(shè)定

在控制面板輸入或調(diào)用預(yù)設(shè)程序：

• 加液體積：50–1000 μL/孔，常用為300 μL。

• 沖洗次數(shù)：1–10次，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求設(shè)置，常用3–5次。

• 浸泡時(shí)間：0–3600秒，通常為30–60秒。

• 震蕩模式：可開或關(guān)，增強(qiáng)液體與孔壁接觸。

• 抽吸強(qiáng)度與時(shí)間：設(shè)定真空壓力和抽液持續(xù)時(shí)間，保證殘液≤1 μL/孔。

3. 洗滌循環(huán)

一個(gè)完整的循環(huán)包括以下步驟：

1. 加液：泵體驅(qū)動(dòng)清洗液經(jīng)8針同步注入微孔板的一行。

2. 浸泡：液體在孔內(nèi)停留設(shè)定時(shí)間，促進(jìn)去除非特異性結(jié)合物。

3. 震蕩：托盤產(chǎn)生輕微振動(dòng)，改善清洗均一性。

4. 抽液：通過負(fù)壓系統(tǒng)快速將孔內(nèi)液體吸入廢液瓶。

5. 重復(fù)：根據(jù)程序設(shè)置進(jìn)行多次循環(huán)，逐行完成全板清洗。

4. 洗后處理

• 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出微孔板，用吸水紙輕觸底部去除殘余液滴。

• 立即進(jìn)入加底物或下一實(shí)驗(yàn)步驟，避免孔內(nèi)干燥。

四、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1. 參數(shù)優(yōu)化

• 不同實(shí)驗(yàn)對(duì)殘液量要求不同，若信號(hào)背景高，可增加沖洗次數(shù)或延長(zhǎng)抽吸時(shí)間。

• 對(duì)于高結(jié)合力底物，可適當(dāng)延長(zhǎng)浸泡。

2. 洗液選擇

• PBS或Tris緩沖液為常用選擇。

• 若需提高去污力，可加入少量非離子型去污劑（如Tween-20）。

• 嚴(yán)禁使用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或有機(jī)溶劑，以免腐蝕泵體與管路。

3. 微孔板兼容性

• 平底板適合大多數(shù)ELISA實(shí)驗(yàn)。

• V底板在細(xì)胞沉降實(shí)驗(yàn)中更佳，但抽液需避免損傷沉降層。

4. 實(shí)驗(yàn)節(jié)奏

• 洗板后應(yīng)立即進(jìn)行后續(xù)操作，避免因干燥導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)改變或非特異性結(jié)合。

五、清洗效果評(píng)估

1. 殘液檢測(cè)

• 在清洗后空孔中加入顯色底物，通過酶標(biāo)儀測(cè)定背景值，殘液少則背景低。

2. 均一性評(píng)價(jià)

• 對(duì)比不同孔位清洗后的信號(hào)值差異，偏差小于10%為佳。

3. 交叉污染檢測(cè)

• 在相鄰孔中加入染料，清洗后觀察是否有液體擴(kuò)散至其他孔。

六、后處理與維護(hù)

1. 實(shí)驗(yàn)后沖洗

• 使用蒸餾水運(yùn)行清洗程序5分鐘，沖掉殘余鹽類和蛋白。

2. 廢液處理

• 廢液瓶清空并沖洗，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室廢棄物規(guī)范處理。

3. 洗針保養(yǎng)

• 每周進(jìn)行一次超聲清洗，防止堵塞。

• 若發(fā)現(xiàn)針尖彎曲，應(yīng)立即更換。

4. 長(zhǎng)期停機(jī)

• 排空液路并吹干，存放于干燥環(huán)境。

七、常見問題及處理

1. 液體分配不均

• 檢查泵速、管路和針頭是否堵塞。

2. 殘液量過大

• 增加抽吸時(shí)間或檢查抽液系統(tǒng)密封性。

3. 板孔間污染

• 確認(rèn)針頭無滴液現(xiàn)象，必要時(shí)降低抽液強(qiáng)度。

4. 儀器報(bào)警

• 廢液瓶滿溢或液路異常，應(yīng)立即停機(jī)處理。

八、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用示例

1. 臨床檢測(cè)

• 乙肝、艾滋病抗體ELISA檢測(cè)，需多次沖洗以減少背景信號(hào)。

2. 食品安全

• 檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留時(shí)，洗板機(jī)保證抗體結(jié)合的特異性。

3. 科研實(shí)驗(yàn)

• 蛋白質(zhì)互作實(shí)驗(yàn)中，清洗精度決定結(jié)合曲線的穩(wěn)定性。

九、流程優(yōu)化與建議

1. 合理設(shè)置程序庫

• 將常用實(shí)驗(yàn)方案存入內(nèi)存，減少重復(fù)設(shè)置。

2. 配合實(shí)驗(yàn)節(jié)拍

• 在大批量檢測(cè)中，應(yīng)合理安排加樣、孵育與洗板的時(shí)間銜接。

3. 實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化

• 建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP），保證不同人員操作結(jié)果一致。

十、總結(jié)

賽默飛Wellwash 1x8洗板機(jī)通過 1×8通道同步清洗、程序化液體分配與抽吸、低殘液控制，實(shí)現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)過程中的高效、均一與標(biāo)準(zhǔn)化。
其實(shí)驗(yàn)流程涵蓋 準(zhǔn)備、參數(shù)設(shè)定、清洗循環(huán)、后處理與維護(hù)，能夠顯著提升ELISA及其他基于微孔板實(shí)驗(yàn)的可靠性。
通過科學(xué)的流程控制與日常維護(hù)，用戶可以在臨床、科研、食品安全等多領(lǐng)域獲得穩(wěn)定、可重復(fù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。