在離心機(jī)操作中,最常見的兩個(gè)“速度”參數(shù)是 rpm(轉(zhuǎn)每分鐘,rotations per minute)和 RCF(relative centrifugal force,相對(duì)離心力,單位為 × g)。該機(jī)型既可直接設(shè)定 rpm,也可切換至 RCF 模式設(shè)定。手冊(cè)指出,用戶可在速度/RCF 顯示之間切換。
rpm 指轉(zhuǎn)子每分鐘旋轉(zhuǎn)的次數(shù)。
RCF 指離心過程中對(duì)樣本產(chǎn)生的離心力,計(jì)算公式為 RCF=1.118×10?5×r×n2\text{RCF} = 1.118 \times 10^{-5} \times r \times n^2RCF=1.118×10?5×r×n2,其中 r 為離心軌道半徑(cm),n 為 rpm。參考手冊(cè)公式。
兩種數(shù)值之間可互換,但因不同轉(zhuǎn)子、不同管型、不同半徑,RCF 與 rpm 的對(duì)應(yīng)關(guān)系會(huì)有所變化。用戶在設(shè)定速度時(shí),應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求(如沉淀某種顆粒)選擇適合的 rpm 或 RCF。
該機(jī)型的最大轉(zhuǎn)速為約 14,800 rpm。
最大 RCF 可達(dá)約 21,100 × g。
速度調(diào)節(jié)的最小設(shè)定可低至約 300 rpm(在 rpm 模式下)用于非常低速需求。
調(diào)節(jié)步進(jìn)為每次 100 rpm 或每次 100 × g(在 RCF 模式)。
因此,在操作時(shí)候,需要了解自己的離心任務(wù),是以 rpm 為主設(shè)定,還是以 RCF 為主,同時(shí)結(jié)合所用轉(zhuǎn)子規(guī)格、樣本類型和離心管規(guī)格來(lái)確定合理參數(shù)。
該機(jī)型控制面板通常包括:
顯示屏:顯示當(dāng)前值(如:轉(zhuǎn)速/RCF、剩余時(shí)間、溫度等)或預(yù)設(shè)值。
“設(shè)定”鍵:通常有“↑(增加)”和“↓(減少)”鍵,用于修改預(yù)設(shè)值。
“模式切換”鍵(如切換 rpm/RCF 顯示)或選擇鍵。
啟動(dòng)/停止鍵:?jiǎn)?dòng)離心運(yùn)行或停止。
開蓋鍵:在安全條件滿足下用于打開機(jī)蓋。
以下為典型設(shè)定 rpm 流程,以該機(jī)型用戶手冊(cè)為依據(jù):
啟動(dòng)設(shè)備,按主電源開關(guān),顯示屏經(jīng)過自檢后進(jìn)入“當(dāng)前值”模式。
關(guān)閉機(jī)蓋,安裝好轉(zhuǎn)子并確保樣本裝載平衡。
在控制面板中選擇“速度”字段(可能顯示為 “Speed” 或 “rpm”)。
按下“↑”或“↓”鍵進(jìn)入預(yù)設(shè)模式。此時(shí)顯示的轉(zhuǎn)速數(shù)值開始閃爍,提示用戶進(jìn)入設(shè)定狀態(tài)。
若要微調(diào),可短按“↑”或“↓”鍵,每次變動(dòng)約 100 rpm。手冊(cè)說明“按鍵短觸即 100 rpm 步進(jìn)”。
若要快速設(shè)定大幅度變動(dòng),可持續(xù)按住“↑”或“↓”鍵不放,此時(shí)數(shù)值將先緩慢變化,幾秒后加速變動(dòng)。釋放鍵后,數(shù)值閃爍數(shù)秒,隨后變?yōu)楫?dāng)前值。
新設(shè)定好 rpm 后,按“Start”鍵啟動(dòng)離心,儀器即加速至預(yù)設(shè) rpm。運(yùn)行中,顯示會(huì)從當(dāng)前值模式切換為運(yùn)行中的實(shí)時(shí)顯示。
如果用戶希望直接以 RCF 為設(shè)定依據(jù),可按“模式切換”鍵切換顯示模式:
在控制面板中選中“Speed / RCF”模式切換鍵。此時(shí)顯示從 rpm 切換至 RCF(× g)模式。
在 RCF 模式下,按“↑”或“↓”鍵設(shè)定 RCF 值,每步約 100 × g。
設(shè)定完成后按“Start”啟動(dòng)。儀器將按所設(shè) RCF 自動(dòng)計(jì)算對(duì)應(yīng) rpm 并運(yùn)行。需注意:當(dāng)使用不同轉(zhuǎn)子或不同管類型時(shí),實(shí)際 RCF 與 rpm 的關(guān)系會(huì)有所不同。手冊(cè)中提醒用戶“對(duì)于其他轉(zhuǎn)子請(qǐng)按照速率/RCF 圖表或公式計(jì)算”。
該設(shè)備允許在離心運(yùn)行過程中修改 rpm 或 RCF 設(shè)定:
當(dāng)離心機(jī)正在運(yùn)行時(shí),短按任一“設(shè)定”鍵即可進(jìn)入預(yù)設(shè)模式,所要修改的數(shù)值字段閃爍,此時(shí)即可調(diào)整參數(shù)。釋放后,新值儲(chǔ)存并即刻生效(前提為操作安全)。
需要注意:若正在高速運(yùn)行且樣本敏感,應(yīng)謹(jǐn)慎變更參數(shù),以免導(dǎo)致樣本震動(dòng)或分層效果不佳。
如果實(shí)驗(yàn)流程明確要求某 RCF 值(例如蛋白沉淀、DNA 顆粒沉降等),建議切換至 RCF 模式設(shè)定,以保證離心力恒定。
如果流程更多是依賴 rpm(例如查轉(zhuǎn)子說明書、經(jīng)驗(yàn)預(yù)設(shè)),也可直接用 rpm 模式設(shè)定。
對(duì)于溫度敏感樣本(如 RNA、蛋白、細(xì)胞裂解液)使用該機(jī)型的冷凍功能時(shí),應(yīng)考慮離心過程中溫度升高的影響,可能需適當(dāng)降低 rpm,增加離心時(shí)間,以保護(hù)樣本結(jié)構(gòu)。
設(shè)備所配轉(zhuǎn)子、管型與樣本量會(huì)影響離心效率。例如:標(biāo)準(zhǔn) 24 × 1.5/2.0 mL 轉(zhuǎn)子在該機(jī)型下可達(dá)最大 14,800 rpm。
若使用容量更小(如 0.5 mL 或 0.2 mL 管)或適配器,實(shí)際離心半徑變小,推薦使用稍低 rpm 以避免離心過程中管壁應(yīng)力過大或樣本濺出。
若樣本量大或傾向于高通量分離,應(yīng)參考轉(zhuǎn)子說明書、性能圖表設(shè)定合適 rpm 與 RCF。該機(jī)型手冊(cè)也提供相應(yīng)模型結(jié)構(gòu)與最大負(fù)載說明。
高 rpm 模式雖然可加速沉淀、縮短離心時(shí)間,但也可能導(dǎo)致:離心管壁溫升、樣本過熱、離心管受力劇增、懸浮液擾動(dòng)。對(duì)于敏感樣本建議適度降低 rpm 、延長(zhǎng)離心時(shí)間或使用減速檔位運(yùn)行。
設(shè)定 rpm/離心時(shí)間應(yīng)參照樣本前處理流程。例如微量離心柱、DNA 沉淀可能需要一定離心時(shí)間以保證完整沉降。
以下為基于手冊(cè)與用戶經(jīng)驗(yàn)的建議范圍(僅供參考,具體仍需根據(jù)樣本/試劑/轉(zhuǎn)子具體要求設(shè)定):
| 樣本類型 | 建議 rpm 范圍 | 建議 RCF 范圍 | 備注 |
|---|---|---|---|
| 普通 1.5/2.0 mL 微量管 | 6,000 – 12,000 rpm | ~5,000 – 15,000 × g | 常規(guī)DNA/蛋白分離 |
| 0.5 mL 微量管 | 10,000 – 14,000 rpm | ~12,000 – 20,000 × g | 小體積高速沉降 |
| 對(duì)溫度敏感樣本 | 4,000 – 8,000 rpm | ~2,000 – 8,000 × g | 細(xì)胞裂解、酶反應(yīng)終止、RNA處理 |
| 按轉(zhuǎn)子最大規(guī)格極限 | 14,000 – 14,800 rpm | ~18,000 – 21,100 × g | 若轉(zhuǎn)子、管型、樣本兼容并無(wú)溫度敏感性 |
上述參數(shù)須依據(jù)實(shí)際轉(zhuǎn)子規(guī)格、管型最大負(fù)荷、樣本量、溫度設(shè)定及離心目的而做調(diào)整。
裝載不均或轉(zhuǎn)子本身狀態(tài)(如裂紋、腐蝕、磨損)會(huì)影響振動(dòng)與安全運(yùn)行,甚至迫使儀器無(wú)法達(dá)到設(shè)定 rpm 。離心運(yùn)行前務(wù)必保證對(duì)稱裝載,并檢查轉(zhuǎn)子狀況。手冊(cè)嚴(yán)重強(qiáng)調(diào)不平衡加載風(fēng)險(xiǎn)。
不同轉(zhuǎn)子、不同離心管/適配器組合會(huì)改變離心半徑 r,從而影響實(shí)際 RCF 與設(shè)定 rpm 之間的關(guān)系。手冊(cè)中指出:“對(duì)于其他轉(zhuǎn)子請(qǐng)使用公式或速率/RCF 圖表”。
在該機(jī)冷凍型中,溫度控制良好可減少熱損傷,但高速運(yùn)行同樣會(huì)產(chǎn)生熱量。若設(shè)備制冷系統(tǒng)未提前預(yù)冷或腔室散熱不良,可能導(dǎo)致樣本溫度升高,從而影響沉降效果。建議在設(shè)定高 rpm 前進(jìn)行預(yù)冷。
雖然該機(jī)型用戶手冊(cè)中未詳細(xì)公開 “加/減速檔位” 數(shù)字,但在類似說明中提到加速時(shí)間約為 10–12 秒。 快速加速與減速可影響樣本沉淀穩(wěn)定性,尤其對(duì)剪切敏感樣本(如胞器、免疫復(fù)合物等)。在這類情景,用戶可適當(dāng)降低 rpm 或選擇較緩加速模式(若設(shè)備支持)以減少剪切力。
設(shè)備長(zhǎng)期使用后,轉(zhuǎn)子表面、密封蓋、軸承等部件可能磨損或積塵。這會(huì)影響實(shí)際轉(zhuǎn)速達(dá)到能力及速度穩(wěn)定性。建議定期檢查轉(zhuǎn)子與設(shè)備維護(hù)狀態(tài)。
用戶設(shè)定參數(shù)時(shí),有時(shí)會(huì)誤把 rpm 直接等同于 RCF 或忽視轉(zhuǎn)子半徑不同導(dǎo)致 RCF 偏差。啟動(dòng)前應(yīng)確認(rèn)操作界面當(dāng)前為 rpm 模式或 RCF 模式,并理解兩者換算關(guān)系。
設(shè)定 rpm 過高可能使離心管、轉(zhuǎn)子或適配器超過其承載規(guī)格,從而造成裂紋、破裂甚至損壞離心機(jī)。務(wù)必參考轉(zhuǎn)子說明中所標(biāo)最大 rpm 或 RCF。
在轉(zhuǎn)速調(diào)設(shè)完畢并啟動(dòng)后,如裝載不平衡或蓋子未牢固鎖定,可能導(dǎo)致離心過程中振動(dòng)、流體濺出、樣本損壞或安全隱患。建議在啟動(dòng)前務(wù)必檢查。
高速離心創(chuàng)造高離心力同時(shí)也可能產(chǎn)生熱量。對(duì)于熱敏感樣本,如 RNA、蛋白酶反應(yīng)底物等,設(shè)定較高 rpm 前應(yīng)確保設(shè)備溫控系統(tǒng)激活并已達(dá)到設(shè)定溫度。否則可能造成樣本降解。
在常規(guī) DNA 沉淀或潔凈過程中,可設(shè)定高速以提升效率。例如:設(shè)定 rpm 為 10,000–12,000 rpm,運(yùn)行 5–10 分鐘。但若樣本中含 RNA 且溫度敏感,建議將溫度設(shè)定約 4–8 °C,并將 rpm 控制在稍低水平(如 8,000–10,000 rpm)以保護(hù)樣本結(jié)構(gòu)。
蛋白沉淀常用 RCF 約 10,000–15,000 × g。切換至 RCF 模式設(shè)定更為直觀。使用該機(jī)時(shí),可設(shè)定為如 12,000 rpm(約 15,000 × g 視轉(zhuǎn)子規(guī)格)運(yùn)行 10 分鐘。若樣本敏感或含細(xì)胞碎片,建議降低 rpm 至 6,000–8,000 rpm 以減少剪切。
這類操作常用較低離心力(例如 5,000–8,000 × g)以避免損傷小體積過濾膜或柱層。將 rpm 設(shè)定為 ~6,000–8,000 rpm,可以有效分離且保護(hù)組件。
若同時(shí)處理 0.5 mL 與 2.0 mL 管(例如使用雙排 18 × 2.0/0.5 mL 轉(zhuǎn)子),應(yīng)參照該轉(zhuǎn)子最大允許 rpm(約 14,800 rpm)并確保裝載平衡。運(yùn)行前優(yōu)先使 rpm 不超過轉(zhuǎn)子說明中的推薦上限。
離心前確認(rèn)機(jī)蓋已鎖定,轉(zhuǎn)子安裝完畢并擰緊。進(jìn)入設(shè)定 rpm / RCF 模式前,確認(rèn)無(wú)外部異物、管蓋關(guān)閉且無(wú)泄漏。
若設(shè)定速度過高且轉(zhuǎn)子/管材不匹配,可能造成轉(zhuǎn)子失穩(wěn)、樣本飛濺或損壞設(shè)備。
在運(yùn)行過程中,如出現(xiàn)異常振動(dòng)、噪音增大或轉(zhuǎn)子異常,應(yīng)立即按“Stop”停止,待轉(zhuǎn)速降至零后再開蓋。
在切換 rpm 或 RCF 模式時(shí),應(yīng)理解操作界面對(duì) rpm 與 RCF 的區(qū)別,避免因設(shè)定混淆導(dǎo)致不當(dāng)離心力。
設(shè)定轉(zhuǎn)速前建議檢查轉(zhuǎn)子、密封蓋、O-型圈、安裝螺母是否完好。手冊(cè)指出若溫差大(驅(qū)動(dòng)軸與轉(zhuǎn)子),不宜立即安裝。
避免頻繁使用“Quick run”(快速離心)功能在高轉(zhuǎn)速下進(jìn)行樣本離心,除非確定樣本適合;該功能忽略預(yù)設(shè)速度,直接以最大功率運(yùn)行。
長(zhǎng)期使用應(yīng)定期檢查設(shè)備是否還能達(dá)到預(yù)設(shè)的 rpm / RCF。如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)速不能達(dá)到設(shè)定值,應(yīng)考慮軸承磨損、轉(zhuǎn)子平衡狀態(tài)、制冷或電源問題。
建議記錄每次離心的 rpm /RCF 設(shè)置、轉(zhuǎn)子型號(hào)、樣本類型及運(yùn)行時(shí)間,以便追溯問題或調(diào)整流程。
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