在光譜分析中,儀器的精度與可靠性高度依賴于校準(zhǔn)工作。賽默飛 GENESYS 40 分光光度計作為一款應(yīng)用廣泛的紫外可見光分析設(shè)備,具備較高的光學(xué)性能和操作便捷性,但若要保證長期穩(wěn)定使用,就必須進(jìn)行定期校準(zhǔn)。校準(zhǔn)不僅能確保數(shù)據(jù)結(jié)果的準(zhǔn)確性,還能延長儀器使用壽命,降低實驗誤差。
校準(zhǔn)工作包含波長校準(zhǔn)、光度校準(zhǔn)、基線校正和雜散光測試等不同環(huán)節(jié)。本文將系統(tǒng)介紹 GENESYS 40 的校準(zhǔn)方法與操作流程,幫助實驗室人員建立規(guī)范的操作標(biāo)準(zhǔn)。
校準(zhǔn)的核心是將儀器的檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)參考進(jìn)行比對,通過調(diào)整或補(bǔ)償,使其輸出值與真實值相符。分光光度計的校準(zhǔn)主要基于以下原理:
波長校準(zhǔn)原理:以已知吸收峰的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(如氧化鈥濾光片)為參照,將儀器輸出波長與理論波長對齊。
光度校準(zhǔn)原理:利用透射率或吸光度已知的標(biāo)準(zhǔn)濾光片或溶液,驗證儀器測量的光強(qiáng)是否正確。
雜散光校正原理:在理論上應(yīng)為零透過率的波長區(qū),檢測儀器是否存在多余光泄露。
基線校正原理:通過空白樣品設(shè)置零點,使光譜掃描從一個穩(wěn)定基線開始。
確保光譜掃描的波長位置準(zhǔn)確,不會出現(xiàn)偏移。
驗證儀器對光強(qiáng)或吸光度的測量是否與真實值一致。
檢驗光學(xué)系統(tǒng)中是否存在非目標(biāo)波長的干擾光。
通過重復(fù)掃描空白樣品,確認(rèn)基線波動是否在允許范圍內(nèi)。
保證使用的比色皿在不同批次實驗中不會引入偏差。
氧化鈥(Holmium oxide)標(biāo)準(zhǔn)濾光片:用于波長校準(zhǔn)。
中性密度濾光片或標(biāo)準(zhǔn)溶液:用于光度校準(zhǔn)。
硫酸鈉或鈉亞硝酸鹽溶液:用于雜散光測試。
高純水或緩沖液:用于基線校正。
標(biāo)準(zhǔn)比色皿:確保實驗重復(fù)性。
溫濕度記錄儀:監(jiān)控環(huán)境條件,避免外界影響校準(zhǔn)結(jié)果。
打開儀器并預(yù)熱 20–30 分鐘,保證光源穩(wěn)定。
將氧化鈥濾光片放入比色皿架。
選擇“波長驗證”模式,掃描范圍設(shè)置為 200–700 nm。
檢查光譜中是否出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)吸收峰,例如 241 nm、287 nm、361 nm 等位置。
比較實測波長與標(biāo)準(zhǔn)值,若偏差在 ±1 nm 內(nèi),說明波長校準(zhǔn)合格。
若偏差超過標(biāo)準(zhǔn),則需進(jìn)行軟件校正或聯(lián)系售后工程師調(diào)整單色器。
插入中性密度濾光片,選擇光度校準(zhǔn)模式。
儀器將自動比較濾光片的標(biāo)稱透過率與實際測得值。
若差值小于規(guī)定限度(如 ±0.005 A),則光度校準(zhǔn)通過。
若差值過大,應(yīng)檢查光源老化、檢測器污染或比色皿污染。
在比色皿中加入高濃度硫酸鈉溶液。
將波長設(shè)置在 220 nm 附近,理論透過率應(yīng)接近 0%。
若儀器顯示透過率大于 0.5%,說明雜散光偏高,需要檢查光學(xué)系統(tǒng)。
用雙蒸水或緩沖液充滿比色皿。
選擇“基線校正”功能,儀器會自動設(shè)置零點。
執(zhí)行空白掃描,觀察基線是否在 ±0.002 A 范圍內(nèi)波動。
將同一樣品進(jìn)行多次測量。
若吸光度變化范圍小于 0.002 A,則說明重復(fù)性良好。
環(huán)境控制:校準(zhǔn)過程應(yīng)在恒溫恒濕實驗室內(nèi)進(jìn)行,避免光源漂移。
比色皿清潔:任何污漬或指紋都會引入誤差。
光源老化:若氘燈或鎢燈使用時間過長,應(yīng)及時更換。
定期校準(zhǔn):建議每 3–6 個月進(jìn)行一次全面校準(zhǔn),高強(qiáng)度使用實驗室應(yīng)每月校驗。
記錄保存:所有校準(zhǔn)數(shù)據(jù)應(yīng)記錄存檔,便于溯源與審計。
波長偏移過大
檢查單色器是否受到灰塵影響。
若硬件損壞需聯(lián)系專業(yè)工程師。
光度不穩(wěn)定
檢查光源燈絲是否老化。
確認(rèn)電源電壓是否波動。
基線漂移
確認(rèn)比色皿是否完全匹配。
檢查是否有氣泡或雜質(zhì)。
雜散光過高
可能是光路元件松動。
檢查濾光片是否受損。
藥物檢測:校準(zhǔn)確?;钚猿煞譂舛葯z測結(jié)果可靠,符合藥典要求。
環(huán)境監(jiān)測:用于水質(zhì)或大氣污染分析時,校準(zhǔn)保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。
食品檢測:在食品成分分析中,校準(zhǔn)防止出現(xiàn)虛假合格或超標(biāo)。
科研實驗:保證光譜掃描曲線與理論數(shù)據(jù)吻合,避免錯誤推論。
隨著分光光度計智能化的發(fā)展,校準(zhǔn)方法也呈現(xiàn)新的趨勢:
自動化校準(zhǔn):軟件可自動完成波長和光度修正,減少人工干預(yù)。
云端校準(zhǔn)記錄:實驗室可通過網(wǎng)絡(luò)共享校準(zhǔn)日志,實現(xiàn)質(zhì)量追蹤。
智能診斷:未來儀器或可實時監(jiān)控光源和檢測器狀態(tài),自動提示校準(zhǔn)周期。
綠色校準(zhǔn):減少有害化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)溶液的使用,采用物理標(biāo)準(zhǔn)件替代。
賽默飛 GENESYS 40 分光光度計的校準(zhǔn)方法涵蓋波長、光度、基線和雜散光等多個方面??茖W(xué)合理的校準(zhǔn)流程不僅能保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性,還能幫助用戶延長儀器壽命。
通過標(biāo)準(zhǔn)濾光片和標(biāo)準(zhǔn)溶液的比對,用戶可以快速發(fā)現(xiàn)并糾正儀器偏差。在日常實驗室管理中,定期校準(zhǔn)與完整記錄是保障數(shù)據(jù)質(zhì)量的核心措施。隨著未來自動化與智能化的發(fā)展,GENESYS 40 的校準(zhǔn)方法將更加簡便高效,為科研與工業(yè)應(yīng)用提供更穩(wěn)定的分析支持。
杭州實了個驗生物科技有限公司