賽默飛分光光度計(jì) BioMate 160 液體試劑使用詳解

一、前言

分光光度法是一種利用物質(zhì)對(duì)特定波長光的吸收特性來進(jìn)行定量或定性分析的重要方法。在這一過程中，液體試劑的選擇與使用至關(guān)重要。賽默飛分光光度計(jì) BioMate 160 作為一款高性能的 UV-Vis 儀器，廣泛應(yīng)用于核酸、蛋白質(zhì)、酶學(xué)反應(yīng)、藥物分析、環(huán)境檢測等多個(gè)領(lǐng)域。為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與重復(fù)性，科學(xué)、規(guī)范地使用液體試劑是必不可少的環(huán)節(jié)。

本文將從 液體試劑分類、配制原則、常見試劑使用場景、操作步驟、注意事項(xiàng)與案例分析 等方面，全面解析在 BioMate 160 上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)液體試劑的使用規(guī)范。

二、液體試劑的分類與作用

在使用分光光度計(jì)時(shí)，液體試劑通常分為以下幾類：

1. 緩沖溶液類

• 常見如 Tris-HCl、PBS（磷酸鹽緩沖液）、乙酸緩沖液。

• 用途：調(diào)節(jié)并穩(wěn)定溶液的 pH，避免被測物質(zhì)降解或構(gòu)象改變。

2. 顯色試劑類

• 常見如考馬斯亮藍(lán) G-250、茚三酮、二硝基苯酚等。

• 用途：與樣品中的目標(biāo)分子發(fā)生特異性反應(yīng)，生成有色產(chǎn)物，從而實(shí)現(xiàn)定量。

3. 反應(yīng)底物類

• 例如用于酶學(xué)反應(yīng)的 ONPG、PNPP 等。

• 用途：通過酶促反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)，便于光度檢測。

4. 對(duì)照與標(biāo)準(zhǔn)溶液類

• 包括空白對(duì)照液、已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

• 用途：校正儀器基線、建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，確保實(shí)驗(yàn)可比性。

5. 特殊分析試劑類

• 如用于核酸檢測的 SYBR Green、用于金屬離子檢測的鄰菲羅啉。

• 用途：擴(kuò)展分光光度法的應(yīng)用范圍。

三、液體試劑的配制與保存原則

在分光光度實(shí)驗(yàn)中，液體試劑的配制與保存直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1. 配制用水

• 使用去離子水或超純水，避免雜質(zhì)離子或有機(jī)物干擾。

2. 濃度控制

• 嚴(yán)格按照試劑說明書或?qū)嶒?yàn)方案要求配置。

• 配制溶液時(shí)，應(yīng)逐級(jí)稀釋，避免濃度過高影響光學(xué)檢測。

3. pH 調(diào)節(jié)

• 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，使用 pH 計(jì)精確調(diào)整。

• 在核酸與蛋白檢測中，pH 的偏差可能導(dǎo)致構(gòu)象變化，影響吸光值。

4. 保存條件

• 緩沖液常溫保存，一般可維持?jǐn)?shù)周穩(wěn)定。

• 顯色劑需避光、低溫保存，避免降解。

• 酶底物類試劑通常需要 -20℃ 保存，臨用前解凍。

四、常見應(yīng)用場景及液體試劑使用方法

1. 核酸定量分析

• 原理：核酸在 260 nm 處有特征吸收峰，A260 值與濃度成正比。

• 試劑使用：

• 緩沖液：一般選用 TE 緩沖液（Tris-EDTA），避免金屬離子對(duì)核酸穩(wěn)定性的影響。

• 空白對(duì)照：TE 緩沖液作為 blank，校正儀器基線。

• 注意事項(xiàng)：

• 確保樣品溶液透明無雜質(zhì)。

• A260/A280 比值應(yīng)在 1.8–2.0 之間，表明核酸純度較高。

2. 蛋白質(zhì)濃度測定

• 常用方法：

• 紫外吸收法（280 nm）：不需顯色劑，直接檢測芳香族氨基酸吸收。

• Bradford 法：利用考馬斯亮藍(lán) G-250 顯色。

• 液體試劑：

• Bradford 試劑現(xiàn)用現(xiàn)配，需避光保存。

• BSA（牛血清白蛋白）作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

• 使用步驟：

1. 在比色皿中加入顯色試劑。

2. 加入待測樣品，混勻后反應(yīng)。

3. 在 595 nm 處測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3. 酶活性測定

• 常用底物：ONPG、PNPP。

• 試劑使用：

• 緩沖液提供穩(wěn)定 pH。

• 底物溶液需現(xiàn)配，避免自發(fā)分解。

• 檢測方法：

• 測定酶反應(yīng)生成產(chǎn)物的吸光度變化，常見檢測波長 405 nm、420 nm。

4. 環(huán)境水樣檢測

• 常見項(xiàng)目：氨氮、總磷、重金屬離子。

• 液體試劑：

• 例如納氏試劑用于氨氮顯色，鉬酸銨用于總磷顯色。

• 操作注意：

• 顯色劑多為強(qiáng)酸或強(qiáng)氧化劑，操作需佩戴防護(hù)手套。

• 標(biāo)準(zhǔn)溶液需新鮮配制，以保證線性關(guān)系準(zhǔn)確。

五、液體試劑使用的標(biāo)準(zhǔn)化操作流程

1. 準(zhǔn)備階段

• 檢查試劑標(biāo)簽與有效期。

• 將所有試劑恢復(fù)至室溫，避免溫度梯度影響反應(yīng)速率。

2. 配制階段

• 使用容量瓶、移液槍，保證體積精確。

• 記錄配制日期及批次。

3. 檢測階段

• 先用空白對(duì)照液調(diào)零，確?；€準(zhǔn)確。

• 樣品與標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)同步操作，保證可比性。

4. 數(shù)據(jù)分析

• 使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算濃度。

• 對(duì)于核酸、蛋白檢測，需結(jié)合比值判斷純度。

六、常見問題與解決思路

1. 吸光度過高

• 樣品濃度過大，應(yīng)稀釋后重測。

2. 顯色不均勻

• 混勻不足，需在反應(yīng)前充分振蕩。

3. 背景值偏高

• 比色皿污染或顯色劑降解，應(yīng)更換比色皿和新鮮試劑。

4. 重復(fù)性差

• 可能由移液誤差或反應(yīng)時(shí)間控制不一致引起。

七、實(shí)驗(yàn)安全與規(guī)范

1. 試劑管理

• 危險(xiǎn)性試劑（如濃酸、顯色劑）應(yīng)單獨(dú)存放。

2. 操作安全

• 佩戴護(hù)目鏡、手套，避免皮膚直接接觸。

3. 廢液處理

• 分類收集，按實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)程處理。

八、典型案例分享

1. DNA 純度檢測

• 研究人員使用 TE 緩沖液溶解 DNA，結(jié)果 A260/A280 = 1.85，表明蛋白污染較少，適合后續(xù) PCR。

2. 蛋白定量實(shí)驗(yàn)

• 通過 Bradford 法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（BSA 0–1 mg/mL），樣品在 595 nm 處吸光度為 0.35，對(duì)應(yīng)蛋白濃度約 0.5 mg/mL。

3. 水質(zhì)檢測

• 使用納氏試劑測定氨氮濃度，顯色明顯，吸光度隨濃度增加呈良好線性。

九、總結(jié)

液體試劑在 BioMate 160 的使用過程中扮演著不可替代的角色。正確的試劑選擇、規(guī)范的配制方法、科學(xué)的保存措施，以及嚴(yán)謹(jǐn)?shù)牟僮髁鞒?，都是確保分光光度法實(shí)驗(yàn)可靠性的關(guān)鍵。通過對(duì)常見應(yīng)用場景的掌握與常見問題的解決，科研人員能夠更高效地利用 BioMate 160 完成核酸、蛋白、酶學(xué)及環(huán)境樣品的檢測任務(wù)。

未來，隨著實(shí)驗(yàn)需求的拓展和新型顯色劑的發(fā)展，BioMate 160 的液體試劑使用也將更加多樣化與精準(zhǔn)化，為科研與檢測提供更加廣闊的空間。