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分光光度法是一種常用的分析檢測(cè)手段，其準(zhǔn)確性不僅依賴于儀器性能，還與樣品的性質(zhì)、處理方式和操作規(guī)范密切相關(guān)。賽默飛分光光度計(jì)BioMate 160作為一款高性能紫外-可見光分光光度計(jì)，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、環(huán)境及食品檢測(cè)中。為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，研究者在使用BioMate 160前必須嚴(yán)格遵循樣品制備與檢測(cè)要求。本文將對(duì)BioMate 160的樣品要求進(jìn)行系統(tǒng)性梳理，以指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)人員更科學(xué)地開展檢測(cè)工作。
BioMate 160主要面向液體檢測(cè)，其典型樣品包括：
核酸樣品：DNA、RNA、寡核苷酸溶液。
蛋白質(zhì)樣品：總蛋白溶液、重組蛋白、多肽溶液。
酶反應(yīng)體系：酶底物、產(chǎn)物及緩沖液組成的反應(yīng)體系。
化學(xué)溶液：各種有機(jī)和無機(jī)溶液，如金屬離子顯色反應(yīng)體系。
部分固體樣品可通過溶解、萃取或稀釋后檢測(cè)：
藥片及膠囊：經(jīng)提取液溶解后進(jìn)行定量。
食品粉末：蛋白粉、維生素粉需溶于適宜溶劑。
環(huán)境樣品：土壤、沉積物需通過酸消解或有機(jī)溶劑萃取。
細(xì)胞裂解液：適用于蛋白和核酸的定量。
血液與血清樣品：需去除雜質(zhì)與蛋白沉淀。
發(fā)酵液與培養(yǎng)基：檢測(cè)代謝產(chǎn)物和營養(yǎng)成分。
DNA與RNA檢測(cè)常用范圍為2 ng/μL – 2000 ng/μL。
吸光度值在0.1–1.0之間時(shí)，定量結(jié)果最為可靠。
若濃度過高，應(yīng)進(jìn)行10–100倍稀釋，避免吸光度超出線性范圍。
紫外吸收法（280 nm）：適用濃度范圍為0.1 mg/mL – 10 mg/mL。
比色法（Bradford、Lowry等）：線性范圍一般在1 μg/mL – 100 μg/mL之間。
若樣品濃度過低，可通過濃縮或延長檢測(cè)時(shí)間提升信噪比。
常見顯色反應(yīng)產(chǎn)物的檢測(cè)濃度范圍為μM – mM級(jí)。
建議檢測(cè)前繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以校正濃度與吸光度之間的關(guān)系。
BioMate 160常用比色皿體積為1 mL – 3 mL。
標(biāo)準(zhǔn)光程為1 cm，特殊情況下可選用0.5 cm或2 cm光程比色皿。
對(duì)于貴重或難以制備的大分子樣品，可使用微量比色皿（50–100 μL）。
微量比色皿需保持樣品液面覆蓋光程窗口，避免氣泡干擾。
建議樣品體積**≥1 mL**，保證反應(yīng)體系在長時(shí)間檢測(cè)中蒸發(fā)損失較小。
石英比色皿：適用于190–1100 nm全波段，推薦用于核酸與蛋白質(zhì)檢測(cè)。
玻璃比色皿：適用波長大于320 nm，不適合紫外區(qū)檢測(cè)。
塑料比色皿：適合一次性檢測(cè)，波長范圍受限（≥230 nm）。
使用前必須用去離子水和無水乙醇清洗并晾干。
避免殘留物或劃痕影響透光率。
樣品需保證透明無雜質(zhì)：
使用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾。
對(duì)懸濁液需進(jìn)行離心（12000 rpm，10 min）。
比色皿中氣泡會(huì)導(dǎo)致光程不均勻，建議檢測(cè)前輕輕震蕩或離心。
緩沖液：常用Tris-HCl、PBS等。
有機(jī)溶劑：乙醇、甲醇可用于某些小分子檢測(cè)，但需注意溶劑本身吸收峰。
對(duì)高濃度樣品進(jìn)行稀釋，使吸光度保持在線性范圍。
對(duì)低濃度樣品使用離心濃縮或膜超濾。
樣品溫度應(yīng)保持室溫，避免因溫度差異導(dǎo)致光譜漂移。
樣品應(yīng)盡快檢測(cè)，避免因氧化或降解影響數(shù)據(jù)。
使用多個(gè)樣品時(shí)，盡量保持同一緩沖體系，減少背景差異。
在動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)中，需先進(jìn)行空白對(duì)照，確保體系穩(wěn)定。
可能原因：樣品濃度過大、氣泡干擾。
解決方法：稀釋樣品，檢查比色皿內(nèi)是否有氣泡。
可能原因：樣品濃度過低、光程不足。
解決方法：更換長光程比色皿或濃縮樣品。
可能原因：樣品中有懸浮顆粒或操作不穩(wěn)定。
解決方法：過濾或離心去除雜質(zhì)，確保樣品均勻性。
可能原因：緩沖液或溶劑本身吸收。
解決方法：在相同條件下進(jìn)行空白對(duì)照。
核酸與蛋白樣品可置于4 ℃冰箱中保存數(shù)小時(shí)至數(shù)天。
對(duì)于不穩(wěn)定的化學(xué)樣品，應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。
核酸樣品可在-20 ℃保存數(shù)月。
蛋白質(zhì)樣品可添加甘油或保護(hù)劑，置于低溫保存。
避免反復(fù)凍融。
添加適量抑菌劑或抗氧化劑。
隨著科研需求的增長，BioMate 160在樣品處理和檢測(cè)方面可能會(huì)進(jìn)一步優(yōu)化：
自動(dòng)稀釋系統(tǒng)：減少人工操作誤差。
智能檢測(cè)模塊：自動(dòng)識(shí)別樣品類型并推薦檢測(cè)條件。
微量檢測(cè)技術(shù)：降低樣品體積至納升級(jí)，滿足前沿研究需求。
賽默飛分光光度計(jì)BioMate 160作為一款應(yīng)用廣泛的紫外-可見分光光度計(jì)，對(duì)樣品的濃度、體積、容器、前處理等方面都有明確的要求。只有嚴(yán)格遵循樣品制備規(guī)范，才能確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性?？蒲腥藛T在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)結(jié)合不同檢測(cè)需求，靈活調(diào)整樣品處理方式，使BioMate 160的性能得到充分發(fā)揮。
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