NanoDrop Eight是賽默飛公司推出的八通道微量紫外-可見分光光度計(jì),它繼承了NanoDrop系列的超微量檢測(cè)優(yōu)勢(shì),并在通量和自動(dòng)化方面實(shí)現(xiàn)突破。該設(shè)備能在1–2 μL的樣品體積下快速完成核酸、蛋白質(zhì)等生物分子的濃度和純度分析,并支持八個(gè)樣品同時(shí)檢測(cè)。規(guī)范化的實(shí)驗(yàn)流程不僅能保證結(jié)果準(zhǔn)確可靠,還能提升實(shí)驗(yàn)室的整體效率。
打開電源,確保系統(tǒng)正常啟動(dòng)。
等待開機(jī)自檢完成,檢查光源狀態(tài)是否正常。
確認(rèn)檢測(cè)平臺(tái)干凈無殘留液滴。
微量移液器及配套槍頭。
無核酸酶水或去離子水,用于清潔。
棉簽或無塵紙,用于擦拭檢測(cè)平臺(tái)。
樣品緩沖液或?qū)φ杖軇?,作為空白?duì)照。
核酸或蛋白樣品需溶于合適緩沖液。
確保樣品濃度處于NanoDrop Eight檢測(cè)范圍。
在檢測(cè)前輕輕混勻,避免沉淀和濃度梯度。
啟動(dòng)NanoDrop Eight主機(jī)與操作軟件。
在界面中選擇實(shí)驗(yàn)?zāi)J?,例如核酸定量、蛋白檢測(cè)或全光譜掃描。
使用溶解樣品的緩沖液作為空白。
在檢測(cè)平臺(tái)上加1–2 μL空白液,關(guān)閉上臂,點(diǎn)擊“Blank”。
系統(tǒng)自動(dòng)完成背景吸收扣除。
在檢測(cè)位置依次滴加樣品,每個(gè)位置1–2 μL。
放下上臂,點(diǎn)擊“Measure”,儀器會(huì)依次完成八個(gè)通道的檢測(cè)。
軟件自動(dòng)顯示濃度、260/280比值、260/230比值以及完整光譜。
若樣品數(shù)量大于八個(gè),可分批次進(jìn)行。
每批次檢測(cè)前均需重新進(jìn)行空白測(cè)定,以保證準(zhǔn)確性。
每次測(cè)定結(jié)果自動(dòng)記錄,可批量導(dǎo)出為Excel、PDF等格式。
可直接上傳至實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)集中管理。
濃度:根據(jù)A260值計(jì)算DNA或RNA濃度。
純度:260/280比值判斷蛋白污染;260/230比值判斷鹽類或酚污染。
光譜曲線:完整掃描幫助確認(rèn)是否存在雜質(zhì)峰。
A280法:直接檢測(cè)芳香族氨基酸吸收。
比色法:結(jié)合Bradford或BCA方法,利用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。
RSD(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差)<2%通常代表結(jié)果重復(fù)性良好。
若出現(xiàn)異常比值或光譜,應(yīng)重新檢測(cè)并檢查樣品質(zhì)量。
加樣準(zhǔn)確:移液操作需穩(wěn)準(zhǔn),保證樣品完全覆蓋光學(xué)平臺(tái)。
防止交叉污染:每次檢測(cè)后必須清潔平臺(tái),避免殘留干擾。
空白選擇:必須與樣品溶劑一致,否則會(huì)引入系統(tǒng)誤差。
環(huán)境要求:保持實(shí)驗(yàn)室溫度穩(wěn)定,避免強(qiáng)光直射。
重復(fù)檢測(cè):關(guān)鍵樣品建議至少三次測(cè)量取均值。
使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片進(jìn)行波長校準(zhǔn)。
使用標(biāo)準(zhǔn)吸光度溶液進(jìn)行光度校準(zhǔn)。
每次開機(jī)后,系統(tǒng)自動(dòng)執(zhí)行光源和光學(xué)檢測(cè)。
若提示異常,應(yīng)停止實(shí)驗(yàn)并聯(lián)系維護(hù)人員。
每次實(shí)驗(yàn)后用去離子水擦拭平臺(tái)。
避免使用腐蝕性清潔劑,以免損壞光學(xué)部件。
定期更換易耗部件(如光源),保證長期穩(wěn)定性。
使用TE緩沖液作為空白。
測(cè)量結(jié)果:濃度符合轉(zhuǎn)染要求時(shí)可直接使用;若260/280比值偏低,應(yīng)進(jìn)一步純化。
空白為無RNA酶水。
結(jié)果中若260/230比值低,提示鹽或酚污染,需要重復(fù)提取或純化。
空白為PBS緩沖液。
通過A280法檢測(cè)蛋白濃度,并結(jié)合比色法交叉驗(yàn)證。
NanoDrop Eight相比傳統(tǒng)單通道儀器,通量更高,效率提升顯著。
微量加樣對(duì)操作者要求較高,操作熟練后可大幅提高重復(fù)性。
在高通量測(cè)序建庫前,利用NanoDrop快速篩選RNA樣品,能有效節(jié)省測(cè)序成本。
教學(xué)中使用NanoDrop Eight,學(xué)生能直觀理解核酸和蛋白質(zhì)的吸收特性,實(shí)驗(yàn)興趣更高。
數(shù)據(jù)導(dǎo)出與LIMS對(duì)接,使實(shí)驗(yàn)室管理更加高效。
隨著實(shí)驗(yàn)室智能化的發(fā)展,NanoDrop Eight的實(shí)驗(yàn)流程有望進(jìn)一步簡(jiǎn)化與升級(jí):
自動(dòng)化加樣系統(tǒng):減少人工誤差。
智能算法輔助:自動(dòng)識(shí)別異常光譜并給出修正建議。
遠(yuǎn)程數(shù)據(jù)監(jiān)控:實(shí)驗(yàn)結(jié)果可實(shí)時(shí)上傳云端,便于多團(tuán)隊(duì)共享。
集成質(zhì)控模塊:未來或可在每次檢測(cè)時(shí)自動(dòng)執(zhí)行精度驗(yàn)證。
NanoDrop Eight為核酸、蛋白及多種生物樣品提供了快速、準(zhǔn)確和高效的檢測(cè)手段。規(guī)范化的實(shí)驗(yàn)流程涵蓋了從樣品準(zhǔn)備、檢測(cè)操作到結(jié)果解讀的完整步驟。通過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),該設(shè)備不僅提升了實(shí)驗(yàn)效率,也保證了檢測(cè)結(jié)果的可靠性。對(duì)于現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室而言,NanoDrop Eight已成為不可或缺的核心檢測(cè)平臺(tái)。
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