賽默飛分光光度計BioMate 160實驗設(shè)置

一、前言

BioMate 160是賽默飛公司推出的一款高性能紫外-可見分光光度計，具有波長范圍廣、檢測靈敏度高、操作便捷等優(yōu)勢。儀器不僅能滿足常規(guī)吸光度和透過率的測定，還能實現(xiàn)DNA/RNA濃度檢測、蛋白分析、動力學(xué)反應(yīng)監(jiān)測和多組分定量分析等應(yīng)用。要獲得準(zhǔn)確可靠的結(jié)果，科學(xué)合理的實驗設(shè)置至關(guān)重要。

二、實驗前準(zhǔn)備設(shè)置

1. 環(huán)境條件

• 溫度控制：實驗室溫度保持在20~25℃，避免劇烈波動。

• 濕度要求：相對濕度控制在60%以下，防止光學(xué)系統(tǒng)受潮。

• 光照條件：遠離強光直射，避免外部光干擾檢測。

• 防震措施：儀器應(yīng)放置在穩(wěn)定臺面，避免震動引起光路不穩(wěn)。

2. 電源檢查

• 電源電壓保持在220V±10%。

• 避免與大功率設(shè)備同一電源回路，減少電磁干擾。

3. 儀器開機與預(yù)熱

• 打開電源后至少預(yù)熱15分鐘。

• 執(zhí)行自檢程序，確保光源、波長和檢測器正常。

4. 樣品與比色皿準(zhǔn)備

• 樣品需經(jīng)過適當(dāng)稀釋，保證吸光度在0.2~1.0之間。

• 紫外區(qū)使用石英比色皿，可見區(qū)使用光學(xué)玻璃比色皿。

• 比色皿透光面需潔凈、無水痕或指紋。

三、基礎(chǔ)實驗設(shè)置

1. 波長設(shè)定

• 單波長測定：輸入目標(biāo)波長，如核酸測定常用260 nm。

• 多波長測定：輸入多個特征吸收峰波長，用于多組分分析。

• 掃描范圍：設(shè)定起止波長與步長，如200~800 nm，步長1 nm。

2. 模式選擇

• 吸光度模式（Abs）：適合溶液濃度與吸收峰強度的關(guān)系研究。

• 透過率模式（T%）：用于檢測光透過率。

• 濃度模式（Conc）：結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線進行定量分析。

• 動力學(xué)模式（Kinetics）：實時監(jiān)測反應(yīng)過程。

3. 光源選擇

• 氘燈：適合200~350 nm紫外區(qū)。

• 鎢燈：適合350~800 nm可見區(qū)。

• 自動切換：根據(jù)波長范圍由系統(tǒng)自動切換。

4. 空白校正

• 使用溶劑作為空白，在設(shè)定波長下進行零點校正。

• 保證測量數(shù)據(jù)排除了溶劑和比色皿吸收的影響。

四、實驗設(shè)置的詳細流程

1. DNA/RNA檢測實驗設(shè)置

• 波長選擇：260 nm（核酸）、280 nm（蛋白）、230 nm（有機物雜質(zhì)）。

• 計算方式：儀器自動給出260/280比值和260/230比值。

• 樣品稀釋：確保A260值在0.2~1.0范圍內(nèi)。

• 保存格式：數(shù)據(jù)可導(dǎo)出為CSV或圖形曲線。

2. 蛋白濃度測定實驗設(shè)置

• 常用方法：考馬斯亮藍法、Lowry法、雙縮脲法。

• 波長設(shè)定：一般選擇595 nm（考馬斯亮藍法）。

• 標(biāo)準(zhǔn)曲線設(shè)置：輸入標(biāo)準(zhǔn)品濃度與對應(yīng)吸光度，建立曲線。

• 實驗數(shù)據(jù)處理：自動計算樣品濃度。

3. 動力學(xué)實驗設(shè)置

• 測量間隔：根據(jù)反應(yīng)速度設(shè)定，如每隔10秒采集一次。

• 測量時間：可設(shè)定幾分鐘到幾小時。

• 溫控條件：若配有溫控附件，可保持恒溫。

• 輸出結(jié)果：儀器實時繪制曲線，輸出速率常數(shù)等數(shù)據(jù)。

4. 波長掃描實驗設(shè)置

• 掃描范圍：如200~800 nm。

• 步長選擇：1 nm或更小。

• 掃描速度：快速掃描用于樣品預(yù)覽，慢速掃描提高分辨率。

• 結(jié)果輸出：生成光譜曲線，可用于峰值位置和形狀分析。

5. 多組分定量實驗設(shè)置

• 波長選擇：輸入各組分特征波長。

• 矩陣輸入：預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度矩陣。

• 自動計算：儀器通過線性代數(shù)方法分離不同組分濃度。

五、數(shù)據(jù)保存與導(dǎo)出設(shè)置

1. 存儲方式

• 內(nèi)部存儲：適合短期保存。

• U盤導(dǎo)出：適合長期保存和后期分析。

2. 文件命名規(guī)范

• 格式示例：20250818_SampleA_DNA260nm

• 包含日期、樣品編號和實驗類型，方便溯源。

3. 輸出文件類型

• 數(shù)據(jù)文件：CSV格式，便于統(tǒng)計軟件處理。

• 圖像文件：JPG或PDF，用于報告和展示。

六、實驗設(shè)置中的注意事項

1. 比色皿方向一致：始終保持一致的放置方向，避免光程差異。

2. 避免氣泡干擾：上樣時注意排除氣泡。

3. 樣品混勻：測量前需充分混勻，避免分層。

4. 樣品濃度控制：吸光度超過1.5需稀釋后再測。

5. 重復(fù)性驗證：重要樣品至少測三次，取平均值。

七、常見誤差與調(diào)整設(shè)置

1. 基線漂移：應(yīng)延長預(yù)熱時間或檢查光源。

2. 波長偏移：通過標(biāo)準(zhǔn)濾光片校準(zhǔn)波長。

3. 吸光度不穩(wěn)定：檢查比色皿是否清潔或是否有氣泡。

4. 信號噪音大：檢查環(huán)境是否有電磁干擾。

八、實驗后設(shè)置與關(guān)機

1. 退出程序：完成實驗后退出當(dāng)前測量模式。

2. 數(shù)據(jù)備份：確認(rèn)數(shù)據(jù)已保存至外部存儲。

3. 光源關(guān)閉：若無實驗需立即關(guān)機，延長光源壽命。

4. 比色皿清理：用去離子水沖洗干凈，擦干保存。

九、良好實驗設(shè)置習(xí)慣的重要性

合理的實驗設(shè)置不僅保證了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性，還能提升實驗效率，避免重復(fù)操作帶來的資源浪費。同時，良好的實驗設(shè)置習(xí)慣也能減少人為誤差，讓BioMate 160的性能得到充分發(fā)揮。

十、總結(jié)

賽默飛BioMate 160分光光度計的實驗設(shè)置涵蓋了環(huán)境條件、電源檢查、波長選擇、模式設(shè)定、空白校正、標(biāo)準(zhǔn)曲線建立、數(shù)據(jù)保存及誤差調(diào)整等多個方面。不同實驗類型需要不同的設(shè)置方案，但核心原則始終是標(biāo)準(zhǔn)化、精確化和規(guī)范化。實驗人員應(yīng)在日常操作中不斷積累經(jīng)驗，形成適合自身研究方向的設(shè)置模板，從而在科研與檢測工作中取得高效、可靠的成果。