伯樂(lè)Bio-Rad 1652100電轉(zhuǎn)儀是一種廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的蛋白電泳轉(zhuǎn)膜設(shè)備,專(zhuān)為Western Blot實(shí)驗(yàn)中的電轉(zhuǎn)膜步驟設(shè)計(jì)。其具備恒壓、恒流以及時(shí)間控制模式,適用于不同類(lèi)型的轉(zhuǎn)膜操作,如半干式(semi-dry)和濕轉(zhuǎn)式(wet transfer)。
該設(shè)備以其穩(wěn)定的性能、操作簡(jiǎn)便、適應(yīng)性強(qiáng)而在生命科學(xué)研究機(jī)構(gòu)、大學(xué)實(shí)驗(yàn)室及工業(yè)實(shí)驗(yàn)環(huán)境中被廣泛采用。
伯樂(lè)1652100主要由以下部分組成:
電源主機(jī):控制電壓、電流、時(shí)間等參數(shù),帶有液晶顯示屏。
轉(zhuǎn)膜裝置接口:連接電極槽與轉(zhuǎn)膜模塊(可接半干轉(zhuǎn)膜或濕轉(zhuǎn)槽)。
電極線(xiàn):將電流從主機(jī)傳遞至轉(zhuǎn)膜槽。
安全保護(hù)機(jī)制:包括溫度過(guò)載保護(hù)和電極短路保護(hù)等。
該設(shè)備通過(guò)電場(chǎng)將蛋白從聚丙烯酰胺凝膠中遷移至膜上(通常為PVDF或NC膜),根據(jù)膜的性質(zhì)與實(shí)驗(yàn)要求選擇不同的電壓/電流控制方式:
恒壓模式:適用于薄凝膠或較短距離遷移。
恒流模式:更適合厚凝膠,可防止電阻變化帶來(lái)的電流波動(dòng)。
定時(shí)功能:用于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)停止,防止過(guò)度遷移造成蛋白失活或膜損傷。
開(kāi)啟設(shè)備預(yù)熱:插上電源,開(kāi)機(jī),進(jìn)入主菜單,確認(rèn)液晶屏可正常顯示參數(shù)。
轉(zhuǎn)膜緩沖液準(zhǔn)備:根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案配置緩沖液(通常為T(mén)ris-Glycine-Methanol體系),并于使用前冷卻至4°C。
膜活化:
若為PVDF膜,先用甲醇浸泡約1分鐘后轉(zhuǎn)入緩沖液中;
NC膜則直接放入緩沖液即可。
凝膠與膜剪裁:根據(jù)電泳膠尺寸剪裁膜與墊紙,保證其大小一致且邊緣整齊。
從下至上依次放置:
膠墊
濾紙(1層,泡濕)
凝膠(電泳完成)
轉(zhuǎn)膜膜片
濾紙(1層)
膠墊
壓實(shí)夾層:確保無(wú)氣泡殘留,尤其是膜與膠之間的界面氣泡需用滾筒或玻棒驅(qū)除。
將已裝好的轉(zhuǎn)膜模塊插入電泳槽;
連接紅黑電極線(xiàn),注意紅色對(duì)應(yīng)陽(yáng)極(膜一側(cè)),黑色對(duì)應(yīng)陰極(膠一側(cè));
向電泳槽中加入預(yù)冷緩沖液,液面應(yīng)完全覆蓋膜層。
在主機(jī)面板上選擇運(yùn)行模式:
恒壓:如設(shè)定100V運(yùn)行90分鐘;
恒流:如設(shè)定300mA運(yùn)行60分鐘;
輸入時(shí)間后確認(rèn);
按下“START”按鈕啟動(dòng)轉(zhuǎn)膜;
實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如需暫停,可使用“PAUSE”,重新開(kāi)始則按“RESUME”。
薄膠或短蛋白推薦恒壓模式;
厚膠或高分子量蛋白推薦恒流模式;
總能量控制在 5~8 W/cm2 為佳,避免蛋白過(guò)熱變性。
濕轉(zhuǎn)過(guò)程推薦在4°C下進(jìn)行,必要時(shí)放置冰盒或冰袋輔助降溫;
高溫會(huì)導(dǎo)致膜蛋白變性、遷移異常甚至膜燒焦。
不可濕手操作主機(jī);
檢查電極線(xiàn)是否完好、插頭接觸是否牢固;
轉(zhuǎn)膜完畢后,應(yīng)先關(guān)閉主機(jī)再拔除電源。
設(shè)備外殼清潔:用干凈軟布擦拭,避免使用有機(jī)溶劑。
電極接頭檢查:定期檢查接頭是否有氧化、脫落等現(xiàn)象。
觸控面板校驗(yàn):如觸控不靈敏需及時(shí)校準(zhǔn)或報(bào)修。
電轉(zhuǎn)槽清潔:每次實(shí)驗(yàn)后清洗電泳槽,防止鹽分結(jié)晶腐蝕材料。
| 故障現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決方法 | 
|---|---|---|
| 顯示無(wú)電流 | 電極未接牢 / 緩沖液導(dǎo)電性不足 | 檢查接頭與緩沖液配置 | 
| 顯示電流過(guò)高 | 電極短路 / 液體溢出 | 檢查夾層裝配、液面高度 | 
| 顯示溫度報(bào)警 | 長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行未降溫 | 中斷操作,冷卻后繼續(xù) | 
| 膜上無(wú)蛋白印跡 | 電極接反 / 電壓太低 | 檢查方向與設(shè)定值 | 
| 出現(xiàn)“鬼帶”或條帶模糊 | 膜未壓實(shí) / 緩沖液未均勻浸泡 | 重新裝夾,清除氣泡 | 
使用專(zhuān)用高速轉(zhuǎn)膜耗材,設(shè)置高壓短時(shí)間(如25V,7分鐘),可快速完成小分子蛋白轉(zhuǎn)膜。
轉(zhuǎn)膜前可染膠進(jìn)行蛋白條帶可視化,保證條帶均一;
轉(zhuǎn)膜后進(jìn)行Ponceau S染色,檢測(cè)轉(zhuǎn)膜均勻性。
可與圖像分析系統(tǒng)(如Chemidoc)聯(lián)動(dòng),通過(guò)設(shè)置時(shí)間自動(dòng)控制轉(zhuǎn)膜周期,提升數(shù)據(jù)可重復(fù)性。
伯樂(lè)1652100電轉(zhuǎn)儀作為電轉(zhuǎn)膜領(lǐng)域的重要工具,憑借其高效、穩(wěn)定、安全的特性,在Western Blot等實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮著重要作用。通過(guò)科學(xué)合理的使用與日常保養(yǎng),不僅可以提高實(shí)驗(yàn)成功率,還能延長(zhǎng)設(shè)備使用壽命。掌握其詳細(xì)操作流程與常見(jiàn)問(wèn)題處理,是每一位實(shí)驗(yàn)人員必備的技能。
如需更高分辨率的操作視頻演示、參數(shù)建議或針對(duì)特殊蛋白的轉(zhuǎn)膜方案,也可基于本設(shè)備的擴(kuò)展功能進(jìn)一步深度探索。




          
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