廠家長沙實(shí)了個(gè)驗(yàn)儀器制造有限公司,質(zhì)保3年只換不修。
下面為您詳細(xì)介紹 Bio?Rad(伯樂)“電穿孔 1652660”型號(hào)(即 Gene Pulser Xcell Total System)操作指南。文章分為產(chǎn)品概述、安裝準(zhǔn)備、樣品及緩沖液準(zhǔn)備、參數(shù)設(shè)置與操作流程、典型應(yīng)用、維護(hù)保養(yǎng)與故障排查六大部分,逐步詳解每個(gè)環(huán)節(jié),便于使用者理解和遵循。
該系統(tǒng)是一款模塊化、高靈活性的電穿孔儀器,貨號(hào) 165-2660,是伯樂 Gene Pulser Xcell 系列的 “總電穿孔系統(tǒng)(Total System)” 版本。
它包括主控單元、CE 模塊(電容擴(kuò)展器)和 PC 模塊(脈沖控制器)、ShockPod 電擊槽,并兼容多種電穿孔比色皿(0.1 cm / 0.2 cm / 0.4 cm 間隙)
其最大優(yōu)勢在于:既能用于真核細(xì)胞(哺乳動(dòng)物、植物)、也能用于原核細(xì)胞(細(xì)菌、酵母),適用范圍廣;預(yù)設(shè)程序豐富,自定義靈活;參數(shù)可調(diào),適應(yīng)不同實(shí)驗(yàn)需求。
技術(shù)指標(biāo)方面:輸出電壓范圍可達(dá) 10-3000 V,電容、時(shí)間常數(shù)、電阻可調(diào)。
因此,若您在基因編輯、轉(zhuǎn)染、細(xì)胞工程、蛋白導(dǎo)入、細(xì)菌轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)中需要一款性能強(qiáng)、可調(diào)整的電穿孔設(shè)備,此型號(hào)非常適合。
確認(rèn)設(shè)備放置于平穩(wěn)、干燥、無強(qiáng)振動(dòng)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,并且具備良好接地。
將主控單元連接電源線,確保所用電源為 100-120 VAC 或 220-240 VAC、50/60 Hz(依據(jù)當(dāng)?shù)貥?biāo)準(zhǔn))
插入 CE 模塊和 PC 模塊(若尚未連接),同時(shí)將 ShockPod 插入設(shè)備相應(yīng)插槽,并確認(rèn)連接牢固。
打開設(shè)備,等待系統(tǒng)完成自檢,界面進(jìn)入主菜單。
操作環(huán)境溫度建議在 0-35 °C,濕度 0-95%(無冷凝)
使用前務(wù)必確認(rèn)設(shè)備接地良好,避免人體或其他金屬部分與未帶電部件發(fā)生接觸。
避免在易爆或強(qiáng)磁場環(huán)境下使用。若設(shè)備提示有異常,應(yīng)立即停止操作檢查。
選擇處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞懸液,細(xì)胞活性高,有利於電穿孔后的存活與轉(zhuǎn)染效率。
倒掉舊培養(yǎng)基,使用無血清培養(yǎng)基或電穿孔專用緩沖液(例如伯樂提供的 Gene Pulser 緩沖液)進(jìn)行洗滌,移除鈣、鎂離子或高鹽成分,以防電弧出現(xiàn)。
調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,例如 1×10? 至 1×10? cells/mL,視細(xì)胞類型而定。
外源物質(zhì)(如質(zhì)粒 DNA / RNA /蛋白等)應(yīng)為高純度,無大分子雜質(zhì),濃度適宜。避免離子強(qiáng)度過高或存在氣泡。
選擇適配的電擊比色皿:0.1 cm、0.2 cm 或 0.4 cm 間隙。應(yīng)確保比色皿干凈、無裂痕、無殘留液體。
該設(shè)備支持兩種主要波形模式:
指數(shù)衰減波(Exponential Decay)—— 通常用于真核細(xì)胞,如哺乳動(dòng)物細(xì)胞、植物原生質(zhì)體。
方波(Square Wave)—— 通常用于原核細(xì)胞,如細(xì)菌、酵母;亦可用于體積較小樣本、高電壓快速脈沖場景。
在主菜單中,可選擇“手動(dòng)操作”、“預(yù)設(shè)程序”或“用戶定義程序”。例如通過上下箭頭選擇波形模式,在高亮參數(shù)后鍵入數(shù)值并按 Enter 鍵確認(rèn)。
根據(jù)樣品類型和比色皿規(guī)格,設(shè)定以下關(guān)鍵參數(shù):
電壓(Voltage):如 0.4 cm 杯使用 250-350 V 是常見哺乳動(dòng)物細(xì)胞設(shè)定(僅供參考,具體需優(yōu)化)
電容(Capacitance)或脈沖寬度:指數(shù)波模式常以 μF(微法)或時(shí)間常數(shù)(ms)形式設(shè)定;方波模式常設(shè)定脈沖時(shí)間與重復(fù)次數(shù)。
脈沖次數(shù)與脈沖間隔:例如方波可能重復(fù) 1-2 次,兩個(gè)脈沖間隔數(shù)秒。
存儲(chǔ)與調(diào)用:設(shè)定好參數(shù)后,可將其保存至用戶協(xié)議中,方便未來重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
將混合好的細(xì)胞與外源物質(zhì)懸液轉(zhuǎn)移至比色皿中,體積通常為10-500 μL,視實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)而定。
檢查是否有氣泡存在,若有則通過輕輕離心或彈擊管壁去除。氣泡會(huì)造成電場異?;螂娀 ?span id="ucwu2yq" class="">
將比色皿插入 ShockPod 電擊槽中,蓋好或確保插槽壓緊。
按下 “Pulse” 按鈕啟動(dòng)電穿孔。設(shè)備將顯示實(shí)際電壓、時(shí)間、電阻等數(shù)據(jù)。若系統(tǒng)檢測到異常,如電?。ˋrc)生成,儀器可能中斷或提示警告。
電穿孔完成后,立即將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到預(yù)熱培養(yǎng)液中恢復(fù)(如含血清的培養(yǎng)基,37 °C孵育)。靜置數(shù)分鐘至十幾分鐘后再進(jìn)行定植或繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
若出現(xiàn)電?。嚎赡茉虬馀荽嬖?、液面過高、離子強(qiáng)度過高。解決方法:重新制備樣品、降低電導(dǎo)、換杯或降低體積。
轉(zhuǎn)染效率低:可能由緩沖液不合適、DNA/RNA質(zhì)量差、電壓設(shè)置過低等因素引起。建議優(yōu)化緩沖條件、檢測核酸純度、適當(dāng)調(diào)高電壓。
細(xì)胞存活率低:若電壓過高、電容/寬度設(shè)置過大、樣品沒冷卻或恢復(fù)不及時(shí),可能造成高死亡率。建議適度降低強(qiáng)度、縮短時(shí)間、立即轉(zhuǎn)移至溫暖培養(yǎng)環(huán)境。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染:使用指數(shù)波模式,可導(dǎo)入質(zhì)粒、siRNA、CRISPR/Cas9構(gòu)建等。儀器預(yù)設(shè)程序豐富,支持快速啟動(dòng)。
細(xì)菌/酵母轉(zhuǎn)化:使用方波模式,快速高電壓脈沖適應(yīng)較小、壁堅(jiān)細(xì)胞。系統(tǒng)支持 0.1 cm/0.2 cm 比色皿,更適合微量樣品。
原代細(xì)胞、電融合、轉(zhuǎn)染難轉(zhuǎn)細(xì)胞系:由于設(shè)備參數(shù)范圍廣、模塊化設(shè)計(jì)靈活,因此可用于高度定制的實(shí)驗(yàn)需求。
實(shí)驗(yàn)重復(fù)性強(qiáng):由于支持保存和調(diào)用實(shí)驗(yàn)參數(shù)、具備電弧防護(hù)功能(PulseTrac? 電路)等,適合高通量或標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室使用。
每次操作完畢,取出比色皿,使用干凈的無紡布或棉布擦拭 ShockPod 電擊槽、電極接觸面,確保無殘留液體。
關(guān)閉設(shè)備電源,斷開電源插頭。若長期不使用,建議覆蓋防塵罩存放。
定期檢查電極表面是否有腐蝕、裂紋或污垢;若有損壞應(yīng)及時(shí)更換。
建議按實(shí)驗(yàn)室管理制度定期對(duì)設(shè)備進(jìn)行校準(zhǔn),包括檢測輸出電壓、電流、電容實(shí)際值、脈沖時(shí)間是否準(zhǔn)確。
保留操作日志,記錄每次電穿孔的參數(shù)與存活率、轉(zhuǎn)染效率,以便日后追溯和優(yōu)化。
盡量避免強(qiáng)烈震動(dòng)或搬動(dòng)設(shè)備,因?yàn)槟K化結(jié)構(gòu)中可能導(dǎo)致內(nèi)部連接松動(dòng)。
保證電源穩(wěn)定,避免電壓驟變或電源雜波對(duì)設(shè)備造成損害。
若設(shè)備出現(xiàn)異常警告(如電阻值異常、電弧頻繁),應(yīng)立即停止操作并進(jìn)行專業(yè)檢查,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果或損壞樣品。
下面列出幾種典型故障情況及建議處理辦法:
電弧頻繁出現(xiàn):常見原因包括樣品中有氣泡、液面過高、電極接觸不良、高離子強(qiáng)度溶液。建議重制樣品、降低電導(dǎo)、選擇合適比色皿、檢查電極連接。
轉(zhuǎn)染效率低 / 樣本未被導(dǎo)入:可能是緩沖液選擇不當(dāng)、電壓/參數(shù)設(shè)定不合理、細(xì)胞狀態(tài)差。建議檢查緩沖體系、核酸質(zhì)量、優(yōu)化電壓與時(shí)間常數(shù)。
細(xì)胞死亡率高:原因可能為電壓過高、脈沖時(shí)間過長、細(xì)胞未冷卻或恢復(fù)條件差。建議降低強(qiáng)度、縮短處理、立即轉(zhuǎn)移至適溫培養(yǎng)環(huán)境。
設(shè)備不響應(yīng)、脈沖按鈕未激活:可能是參數(shù)未設(shè)定或模式未選擇,或者模塊連接不良。確認(rèn)已選擇波形模式、設(shè)定參數(shù)并按 Enter 鍵、模塊已正確安裝。
輸出電壓不達(dá)標(biāo)或不穩(wěn)定:可能為電源問題、電極老化、內(nèi)部維護(hù)欠缺。建議檢查電源、連接線、設(shè)備是否需要專業(yè)維護(hù)或校準(zhǔn)。
綜上所述,1652660 型號(hào)的伯樂 Gene Pulser Xcell 系統(tǒng)是一款在科研領(lǐng)域廣泛使用、功能強(qiáng)大、靈活性高的電穿孔儀器。憑借其模塊化設(shè)計(jì)、廣泛適用的波形模式、豐富的參數(shù)可調(diào)節(jié)性、良好的重復(fù)性和可靠性,它適合從基礎(chǔ)科研到應(yīng)用研究的多個(gè)場景。
通過嚴(yán)格遵守上述操作指南、做好細(xì)胞與樣品的準(zhǔn)備、精準(zhǔn)設(shè)定參數(shù)、維護(hù)設(shè)備狀態(tài),并結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果反饋優(yōu)化流程,您將能有效提升實(shí)驗(yàn)效率、降低失敗率、延長設(shè)備使用壽命。
如果您在具體參數(shù)優(yōu)化、特殊細(xì)胞類型(如懸浮細(xì)胞、原代細(xì)胞、難轉(zhuǎn)染系)或?qū)嶒?yàn)方案設(shè)計(jì)上有疑問,可進(jìn)一步咨詢技術(shù)支持或查閱伯樂提供的完整說明書與技術(shù)文檔。
          
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