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質(zhì)保3年只換不修，廠家長沙實了個驗儀器制造有限公司

一、概述

伯樂（Bio-Rad）電穿孔儀165-2660是一款精密的電轉(zhuǎn)化設(shè)備，用于將外源DNA、RNA或蛋白質(zhì)分子導(dǎo)入細(xì)胞、原生質(zhì)體或組織樣品中。該儀器通過在細(xì)胞膜上施加瞬時高壓脈沖，產(chǎn)生可逆性納米級孔洞，使分子能夠透過細(xì)胞膜進(jìn)入胞內(nèi)，從而實現(xiàn)基因轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染。

作為國際實驗室廣泛使用的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備之一，165-2660以其高精度電壓控制、寬范圍電容可調(diào)與卓越的時間常數(shù)穩(wěn)定性著稱。為了確保實驗的高效性與結(jié)果的可重復(fù)性，嚴(yán)格遵循規(guī)范化的操作流程至關(guān)重要。

本操作指南將從設(shè)備準(zhǔn)備、參數(shù)設(shè)定、樣品處理、放電操作、數(shù)據(jù)記錄及安全收尾等環(huán)節(jié)，系統(tǒng)闡述165-2660的標(biāo)準(zhǔn)化操作步驟，幫助研究人員高效、安全地完成電穿孔實驗。

二、實驗前準(zhǔn)備

1. 環(huán)境條件

• 溫度要求：20–25°C

• 濕度要求：≤60%

• 電源規(guī)格：220V ±10%，50/60Hz，接地良好

• 操作臺要求：干燥、平穩(wěn)、無金屬裸露與液體濺灑

• 照明條件：環(huán)境光充足，以便觀察電極與顯示狀態(tài)

實驗環(huán)境應(yīng)避免高濕或強(qiáng)磁干擾，設(shè)備周圍保持至少30 cm的通風(fēng)間距。

2. 儀器檢查

在正式實驗前應(yīng)進(jìn)行全面設(shè)備檢查：

儀器通電后進(jìn)行自檢，若屏幕顯示“Ready”，則系統(tǒng)正常。

3. 試劑與材料準(zhǔn)備

• 電轉(zhuǎn)杯：標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格0.1 cm、0.2 cm、0.4 cm，根據(jù)實驗選擇；

• 細(xì)胞樣品：對數(shù)生長期細(xì)胞；

• 緩沖液：低離子強(qiáng)度緩沖液（如1 mM HEPES）；

• DNA/RNA溶液：純度高、無鹽殘留；

• 無菌移液器與吸頭：防止污染；

• 冰浴或冷卻模塊：用于放電前冷卻樣品。

樣品應(yīng)預(yù)冷至4°C，以減少電穿孔過程中熱效應(yīng)帶來的細(xì)胞損傷。

三、設(shè)備啟動與初始化

1. 連接電源與接地線。
   確認(rèn)接地端牢固，以防靜電或電壓泄漏。

2. 按下電源鍵，設(shè)備自動進(jìn)入自檢程序。

3. 觀察顯示屏提示：若顯示“System Ready”，則設(shè)備可操作；若出現(xiàn)“Check System”或“Error”，需重新啟動或聯(lián)系技術(shù)維護(hù)。

4. 確保安全蓋處于開啟狀態(tài)，便于安裝電轉(zhuǎn)杯。

四、參數(shù)設(shè)定

1. 進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置界面

按下“Set”或“Parameter”鍵，進(jìn)入設(shè)置模式。使用旋鈕或數(shù)字鍵輸入?yún)?shù)值。

2. 電壓設(shè)定

• 范圍：0.2–2.5 kV

• 調(diào)節(jié)精度：0.01 kV

• 建議設(shè)置：

• 細(xì)菌：2.3–2.5 kV

• 酵母：1.0–1.5 kV

• 哺乳細(xì)胞：0.25–0.8 kV

• 植物原生質(zhì)體：0.6–1.0 kV

電壓過高可能引起電弧，過低則無法形成足夠電場。

3. 電容設(shè)定

• 范圍：25–3300 μF

• 推薦設(shè)置：

• 細(xì)菌：25 μF

• 酵母：50 μF

• 哺乳細(xì)胞：250 μF

• 植物原生質(zhì)體：1000 μF

電容控制能量儲存量，需與樣品類型匹配。

4. 脈沖模式與時間常數(shù)

伯樂165-2660采用指數(shù)衰減放電。時間常數(shù)（τ）表示能量釋放速率，單位為毫秒（ms）。系統(tǒng)會在放電后自動計算實際τ值。
理想范圍：4–10 ms。

5. 預(yù)設(shè)存儲

設(shè)備可保存多組實驗程序，設(shè)置完成后按“Store”鍵保存參數(shù)組合，以便重復(fù)使用。

五、樣品準(zhǔn)備與裝載

1. 細(xì)胞與DNA混合

在無菌條件下，將DNA或RNA加入預(yù)處理細(xì)胞懸液中：

• 混合后輕輕吹打均勻，避免氣泡；

• 總體積約為80–100 μL（適用于0.2 cm電轉(zhuǎn)杯）；

• 樣品濃度：1×10? cells/mL。

2. 電轉(zhuǎn)杯處理

• 使用前徹底清潔并干燥；

• 若為一次性杯體，拆封后立即使用；

• 裝樣時液面應(yīng)覆蓋電極板。

3. 冷卻操作

將裝好樣品的電轉(zhuǎn)杯置于冰上或冷卻模塊中冷卻1分鐘。
冷卻可防止熱積累造成細(xì)胞膜破裂。

4. 安裝電轉(zhuǎn)杯

• 打開安全蓋；

• 將電轉(zhuǎn)杯插入電極槽，確保卡入定位槽；

• 關(guān)閉安全蓋，系統(tǒng)顯示“Ready for Pulse”。

六、放電操作

1. 放電步驟

1. 按下“Pulse”鍵啟動放電；

2. 放電瞬間，顯示屏同步顯示實際電壓與時間常數(shù)；

3. 放電結(jié)束后自動進(jìn)入“Cooling”狀態(tài)，系統(tǒng)釋放殘余電荷；

4. 當(dāng)屏幕恢復(fù)顯示“Ready”，方可取出電轉(zhuǎn)杯。

整個放電過程持續(xù)時間極短（通常小于10毫秒），但能量釋放極為集中。

2. 注意事項

• 操作期間不得觸摸設(shè)備金屬部位；

• 確保安全蓋關(guān)閉，否則系統(tǒng)拒絕放電；

• 放電后等待至少10秒再取樣，避免殘余電荷。

七、樣品回收與復(fù)蘇

1. 樣品轉(zhuǎn)移

放電后立即用無菌吸頭將樣品轉(zhuǎn)移至含適當(dāng)培養(yǎng)基的離心管中。
若樣品為細(xì)菌，可加入SOC培養(yǎng)基（37°C復(fù)蘇1小時）。
若為哺乳細(xì)胞，則轉(zhuǎn)移至含血清培養(yǎng)基中靜置復(fù)蘇2小時。

2. 樣品復(fù)蘇條件

復(fù)蘇期間應(yīng)避免劇烈震蕩，以利細(xì)胞膜修復(fù)。

八、數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果監(jiān)控

1. 時間常數(shù)與放電數(shù)據(jù)

實驗結(jié)束后，記錄設(shè)備顯示的時間常數(shù)（τ）。
標(biāo)準(zhǔn)參考范圍：

• 細(xì)菌：4–5 ms；

• 酵母：6–8 ms；

• 哺乳細(xì)胞：8–10 ms。

時間常數(shù)偏低說明放電過快或樣品電阻低，偏高則代表能量釋放過慢。

2. 電弧檢測

若出現(xiàn)“ARC DETECTED”提示，說明放電過程中發(fā)生電弧放電，可能由以下原因引起：

• 樣品中有氣泡；

• 電轉(zhuǎn)杯潮濕；

• 緩沖液離子濃度過高。

應(yīng)重新制備樣品并清潔電轉(zhuǎn)杯后再試。

3. 數(shù)據(jù)保存

165-2660可自動存儲最近1000組實驗數(shù)據(jù)，包括：

• 電壓與電容設(shè)定值；

• 實測時間常數(shù)；

• 放電次數(shù)；

• 電弧狀態(tài)記錄。

數(shù)據(jù)可通過USB接口導(dǎo)出，以供統(tǒng)計分析。

九、安全與維護(hù)

1. 操作安全

• 放電時嚴(yán)禁開啟安全蓋；

• 使用絕緣手套操作高壓接口；

• 禁止在濕手條件下觸摸設(shè)備；

• 確保接地線連接可靠。

2. 清潔與保養(yǎng)

• 實驗后用無離子水清洗電極槽；

• 電轉(zhuǎn)杯可用70%乙醇消毒后自然晾干；

• 不得使用含氯清潔劑；

• 外殼用干布擦拭，防止積塵。

3. 定期檢查

• 每6個月檢測電壓與電容輸出精度；

• 每12個月進(jìn)行一次全面校準(zhǔn)；

• 若長時間未使用，重新開機(jī)前應(yīng)進(jìn)行預(yù)熱10分鐘。

十、常見問題與處理

十一、實驗后收尾

1. 關(guān)閉設(shè)備電源，待風(fēng)扇停止后拔下電源線；

2. 清理工作臺面與樣品殘留；

3. 將儀器覆蓋防塵罩并存放于干燥處；

4. 記錄實驗編號、參數(shù)與結(jié)果，建立電子檔案；

5. 若出現(xiàn)異常放電或設(shè)備報警，應(yīng)填寫維護(hù)記錄表并通知管理員。

十二、結(jié)果驗證與質(zhì)量控制

為了確保實驗的科學(xué)性與一致性，需定期驗證設(shè)備性能：

1. 放電穩(wěn)定性測試：
   連續(xù)10次相同條件放電，計算時間常數(shù)的平均值與標(biāo)準(zhǔn)差（SD < 0.2 ms）。

2. 電壓精度驗證：
   使用外部高壓計測量輸出電壓，偏差不得超過±1%。

3. 轉(zhuǎn)化效率驗證：
   使用標(biāo)準(zhǔn)樣品（如pUC19質(zhì)粒與大腸桿菌DH5α）進(jìn)行實驗，對比歷史轉(zhuǎn)化效率，應(yīng)在正常范圍內(nèi)波動（±10%）。

4. 安全功能驗證：
   在安全蓋打開狀態(tài)下測試放電鎖定功能，確保系統(tǒng)自動中斷。

十三、參數(shù)優(yōu)化建議

實驗過程中，可根據(jù)樣品反應(yīng)情況微調(diào)參數(shù)以獲得最佳結(jié)果：

若轉(zhuǎn)化效率偏低，可微調(diào)電壓±0.1 kV或調(diào)整電容以延長時間常數(shù)。