質(zhì)保3年只換不修,廠家長沙實了個驗儀器制造有限公司
伯樂(Bio-Rad)電穿孔儀165-2660是一款高精度、智能化的電轉(zhuǎn)化設(shè)備,廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、細(xì)胞工程及基因編輯領(lǐng)域。該設(shè)備以高能脈沖電場為核心技術(shù),通過瞬時放電在細(xì)胞膜上形成可逆性微孔,使外源DNA、RNA或蛋白分子能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,從而實現(xiàn)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染。其設(shè)計兼顧實驗穩(wěn)定性與操作靈活性,能夠滿足不同類型細(xì)胞的電穿孔需求,包括細(xì)菌、酵母、哺乳動物細(xì)胞以及植物原生質(zhì)體。
165-2660電穿孔儀采用先進(jìn)的數(shù)字化控制系統(tǒng),具有自動檢測電阻、電容及脈沖輸出的功能。設(shè)備具備多種模式可選,可進(jìn)行時間常數(shù)模式與方波脈沖模式切換,以適配不同實驗體系。其可靠的硬件結(jié)構(gòu)與精密的能量輸出控制,為實驗重復(fù)性和細(xì)胞存活率提供了技術(shù)保障。
精確的脈沖控制系統(tǒng)
設(shè)備采用高性能微處理芯片,可實時監(jiān)控電壓、電流及時間常數(shù)。電場強度可在0.2 kV至2.5 kV范圍內(nèi)連續(xù)調(diào)節(jié),滿足從原核生物到真核細(xì)胞的不同需求。
寬范圍參數(shù)調(diào)節(jié)
電容值可在25 μF至3300 μF之間設(shè)定,電阻可根據(jù)實驗要求自動匹配,從而獲得理想的時間常數(shù)(通常在4–6 ms范圍)。這種可調(diào)節(jié)設(shè)計極大地提高了實驗靈活性。
高安全性與重復(fù)性
儀器具備過壓保護(hù)與自動放電系統(tǒng),可在操作結(jié)束后迅速釋放殘余電荷,防止誤觸電擊。輸出波形穩(wěn)定,重復(fù)誤差小于1%,保證了實驗結(jié)果的可重復(fù)性。
人性化操作界面
前面板設(shè)計簡潔,配有高亮液晶顯示屏,可清晰顯示設(shè)定電壓、時間常數(shù)、脈沖次數(shù)及輸出曲線。旋鈕式參數(shù)調(diào)節(jié)與數(shù)字化輸入結(jié)合,操作直觀且響應(yīng)迅速。
兼容多種電穿孔杯
設(shè)備支持0.1 cm、0.2 cm及0.4 cm間隙的電轉(zhuǎn)杯,適應(yīng)不同細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)化體積與電場強度需求。
電穿孔的核心是電場強度(E)、脈沖時間(t)與細(xì)胞類型三者的匹配。一般公式為:
E=VdE = \frac{V}mcwgo2yE=dV
其中V為設(shè)定電壓,d為電轉(zhuǎn)杯間隙。不同細(xì)胞對電場強度敏感性不同,因此合理設(shè)定參數(shù)是成功轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵。
電壓設(shè)定
對于大腸桿菌等細(xì)菌,推薦設(shè)定電壓為1.8–2.5 kV;
對于酵母,通常使用0.8–1.5 kV;
對于哺乳動物細(xì)胞,如CHO、HEK293等,則建議電壓控制在0.25–0.8 kV范圍。
電容與時間常數(shù)
時間常數(shù)τ由電容C與電阻R共同決定:
τ=R×C\tau = R \times Cτ=R×C
一般來說,細(xì)菌電轉(zhuǎn)的理想時間常數(shù)為4–5 ms,真核細(xì)胞可適當(dāng)延長至8–10 ms。165-2660內(nèi)置自動時間常數(shù)測量功能,可在放電完成后自動顯示τ值,方便優(yōu)化。
脈沖次數(shù)與間隔
設(shè)備可設(shè)定單脈沖或多脈沖輸出。單脈沖模式用于標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化實驗,多脈沖模式適用于需要更高DNA攝取率的哺乳細(xì)胞。脈沖間隔可在50–500 ms內(nèi)調(diào)節(jié),以防止過熱損傷。
大腸桿菌轉(zhuǎn)化
電轉(zhuǎn)杯:0.2 cm
電壓:2.5 kV
電容:25 μF
電阻:200 Ω
時間常數(shù):約5 ms
結(jié)果:轉(zhuǎn)化效率高,細(xì)胞存活率良好。
酵母電穿孔
電轉(zhuǎn)杯:0.2 cm
電壓:1.2 kV
電容:50 μF
時間常數(shù):約7 ms
需在預(yù)冷條件下進(jìn)行,防止熱損傷。
哺乳動物細(xì)胞轉(zhuǎn)染
電轉(zhuǎn)杯:0.4 cm
電壓:0.45 kV
電容:250 μF
脈沖數(shù):2
間隔:100 ms
建議在無血清緩沖液中操作,以提高穿孔效率。
植物原生質(zhì)體電穿孔
電轉(zhuǎn)杯:0.4 cm
電壓:0.8 kV
電容:1000 μF
時間常數(shù):約10 ms
實驗后需立即在滲透平衡液中復(fù)蘇。
設(shè)備準(zhǔn)備
將電穿孔儀165-2660接入穩(wěn)定電源,檢查電纜與轉(zhuǎn)杯連接是否牢固。確保儀器處于待機(jī)狀態(tài)。
細(xì)胞樣品準(zhǔn)備
采用無鹽緩沖液洗滌細(xì)胞,去除導(dǎo)電離子,避免放電時產(chǎn)生電弧。DNA或質(zhì)粒樣品應(yīng)純度高,無雜質(zhì)。
裝樣與電轉(zhuǎn)
將樣品與DNA混勻后加入電轉(zhuǎn)杯,輕輕敲擊使液體均勻分布。插入轉(zhuǎn)杯槽位,蓋緊安全蓋。根據(jù)預(yù)設(shè)程序啟動脈沖。
放電與顯示
放電后屏幕將自動顯示實際電壓、電流及時間常數(shù)。記錄數(shù)據(jù)以便分析。
復(fù)蘇與培養(yǎng)
放電完成后立即將樣品轉(zhuǎn)入適當(dāng)復(fù)蘇培養(yǎng)基中,靜置或輕搖數(shù)分鐘后按實驗要求培養(yǎng)。
實驗者應(yīng)記錄每次轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵參數(shù),包括電壓、電容、時間常數(shù)、樣品體積及轉(zhuǎn)化效率。通過比較不同參數(shù)組合的結(jié)果,可逐步優(yōu)化實驗條件。
若出現(xiàn)電弧放電,可適當(dāng)降低電壓或更換緩沖液;若轉(zhuǎn)化效率偏低,可延長時間常數(shù)或增加脈沖次數(shù)。
日常清潔
使用后應(yīng)立即取出轉(zhuǎn)杯,用無離子水清洗并晾干,防止鹽分殘留。儀器外殼可用柔軟布輕拭,避免使用有機(jī)溶劑。
電極檢查
定期檢查電極表面是否有腐蝕或燒蝕痕跡。若發(fā)現(xiàn)損傷,應(yīng)及時更換以防影響電場均勻性。
軟件與校準(zhǔn)
每隔6個月應(yīng)進(jìn)行一次校準(zhǔn)測試,確保電壓輸出準(zhǔn)確。Bio-Rad官方提供校準(zhǔn)工具包與軟件升級包,可通過USB接口更新。
儲存條件
儀器應(yīng)放置于干燥、無塵環(huán)境,避免陽光直射與高溫。長期不用時,應(yīng)斷開電源并覆蓋防塵罩。
放電前務(wù)必確認(rèn)安全蓋關(guān)閉;
禁止在帶電狀態(tài)下更換轉(zhuǎn)杯;
實驗操作應(yīng)佩戴防護(hù)手套與護(hù)目鏡;
遇到異常聲響或過熱,應(yīng)立即斷電檢查。
設(shè)備具有自動放電保護(hù)系統(tǒng),但仍應(yīng)保持警覺,防止高壓殘留造成安全隱患。
伯樂電穿孔儀165-2660憑借其高精度控制、操作簡便與穩(wěn)定輸出,被廣泛應(yīng)用于基因編輯、疫苗研發(fā)、抗體篩選及細(xì)胞治療研究中。相比化學(xué)轉(zhuǎn)化和脂質(zhì)轉(zhuǎn)染方法,電穿孔的優(yōu)勢在于不依賴載體體系,能夠適用于多種細(xì)胞類型,并且轉(zhuǎn)化效率高、背景干擾小。
在CRISPR/Cas9系統(tǒng)中,該設(shè)備可實現(xiàn)質(zhì)粒、mRNA及RNP復(fù)合物的高效導(dǎo)入,是精準(zhǔn)基因操作的重要工具。
          
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