伯樂1652100電穿孔儀是一款專為基因轉(zhuǎn)染實驗設計的高精度電穿孔系統(tǒng),適用于將外源DNA、RNA、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)導入各種哺乳動物細胞、細菌、酵母、昆蟲細胞及植物細胞中。該設備基于脈沖電場原理,通過短時間高電壓使細胞膜暫時形成“納米孔”,從而實現(xiàn)分子導入。
伯樂1652100系統(tǒng)具有電壓精度高、波形選擇靈活、細胞適應性強等優(yōu)點,是細胞轉(zhuǎn)染實驗中常用的標準設備之一。
主控電源模塊(Gene Pulser Xcell Main Unit):調(diào)節(jié)電壓、電容、電阻及脈沖持續(xù)時間等關(guān)鍵參數(shù)。
ShockPod電極模塊:用于細胞懸液與電場接觸的核心反應區(qū)域。
顯示界面與操作面板:設置與顯示脈沖參數(shù),包括波形、電壓、電阻、電容等。
連接線纜:連接主機與電極模塊。
電穿孔是通過瞬間高壓電場改變細胞膜通透性,使目標分子能夠快速進入細胞質(zhì)甚至細胞核。設備可輸出方波(square wave)或指數(shù)衰減波(exponential decay wave),針對不同類型細胞和分子調(diào)節(jié)參數(shù),達到最佳轉(zhuǎn)染效率。
細胞狀態(tài):選擇對數(shù)生長期的細胞,活力高、密度適中(如10?~10?/mL);
洗滌細胞:使用無鈣無鎂的PBS或?qū)S秒姶┛拙彌_液(低電導)反復洗滌,避免電流短路;
混合外源物質(zhì):將待轉(zhuǎn)染的DNA、RNA或蛋白質(zhì)與細胞混合,體積控制在100–400 μL;
轉(zhuǎn)移至穿孔杯:將混合液轉(zhuǎn)移至預冷穿孔杯(cuvette),常用電極間距為0.2 cm或0.4 cm。
將穿孔杯插入ShockPod模塊;
ShockPod通過專用連接線與主機連接;
打開設備,進入主界面,選擇適配模式(如Bacteria、Mammalian、Yeast等);
設置穿孔參數(shù)(以指數(shù)衰減波為例):
電壓(V):100–2500V,取決于細胞類型;
電容(μF):常見值1–1000μF;
電阻(Ω):設定為并聯(lián)或開放回路,通常用于調(diào)整時間常數(shù);
波形:Exponential decay 或 Square wave;
脈沖數(shù):1 或多次(可手動或自動控制)。
點擊“Pulse”按鈕,設備即刻釋放電壓;
屏幕顯示“Time constant”或“Pulse width”,代表脈沖實際作用時間;
完成后立即取出穿孔杯,將細胞輕柔轉(zhuǎn)入溫和培養(yǎng)基中進行復蘇。
將復蘇后的細胞置于培養(yǎng)板中繼續(xù)孵育;
6–24小時后可檢測目標分子的表達情況(如熒光標記、PCR、Western Blot等)。
| 細胞類型 | 電壓(V) | 電容(μF) | 間距(cm) | 波形 | 
|---|---|---|---|---|
| 大腸桿菌 | 1800–2500 | 25 | 0.2 | 指數(shù)衰減波 | 
| 酵母 | 1500–2000 | 25 | 0.2 | 指數(shù)衰減波 | 
| 小鼠B細胞 | 300–350 | 950 | 0.4 | 指數(shù)衰減波 | 
| CHO細胞 | 250–300 | 500 | 0.4 | 指數(shù)衰減波 | 
| NIH-3T3 | 250–300 | 500 | 0.4 | 指數(shù)衰減波 | 
| 植物原生質(zhì)體 | 500–1500 | 50–250 | 0.4 | 方波 | 
注:以上參數(shù)僅供參考,需根據(jù)實際實驗條件微調(diào)優(yōu)化。
避免使用含有高鹽或血清的培養(yǎng)基進行電穿孔操作,推薦使用低電導緩沖體系,如HEPES、cytomix、Opti-MEM等。
杯子必須干凈無裂紋;
使用前預冷至4°C;
每次使用后徹底清洗或更換,避免交叉污染。
電壓與電極間距成正比;
同一種細胞,間距不同,所需電壓亦需調(diào)整。
高密度、老化或狀態(tài)不佳的細胞會顯著降低轉(zhuǎn)染效率并提高死亡率。使用對數(shù)生長期、單細胞懸液效果最佳。
| 問題描述 | 原因分析 | 解決辦法 | 
|---|---|---|
| 無電壓輸出 | 電極連接不良 / 杯內(nèi)液體過少 | 檢查ShockPod插接 / 增加液體體積 | 
| 細胞全部死亡 | 電壓過高 / 電容過大 / 操作時間延遲 | 降低參數(shù) / 加快復蘇步驟 | 
| 穿孔不成功 | 電壓過低 / 波形不適 / 杯有污染 | 調(diào)整參數(shù) / 更換杯 / 檢查DNA質(zhì)量 | 
| 電極間放電 | 液體溢出電極間隙 | 檢查穿孔杯是否液面過高 | 
| 時間常數(shù)為0 | 液體導電性過強(如PBS含鈣鎂) | 更換為低導電緩沖液 | 
清潔穿孔杯與ShockPod模塊;
檢查電極是否被腐蝕或氧化;
液體潑濺部位要及時用酒精棉擦拭清潔。
檢查面板按鈕、連接線接口是否老化;
查看電容參數(shù)調(diào)節(jié)是否準確;
運行自檢程序確保輸出電壓穩(wěn)定。
可通過連接電腦或設備接口,獲取廠商更新程序提升精度與穩(wěn)定性。
伯樂1652100支持在同一實驗中施加連續(xù)多波段穿孔波形(如雙脈沖策略),可提高較難轉(zhuǎn)染細胞的成功率。
設備可自動保存電穿孔數(shù)據(jù)(如時間常數(shù)、電壓、電流等),便于實驗追蹤與重現(xiàn)。
可搭配伯樂的多通道穿孔系統(tǒng)(如96孔穿孔板),實現(xiàn)大規(guī)模轉(zhuǎn)染實驗,適用于基因篩選與藥物轉(zhuǎn)導。
穿孔過程中高壓釋放,請勿觸碰ShockPod區(qū)域;
若聞異味或聽到異常聲音,請立即斷電檢查;
嚴禁在潮濕環(huán)境中操作主機;
液體濺入設備需立即擦干,必要時聯(lián)系維修人員。
伯樂1652100電穿孔儀是一款高效、安全、靈活的電穿孔轉(zhuǎn)染平臺,能夠滿足多種實驗需求。從細菌、酵母到哺乳動物細胞,再到植物原生質(zhì)體,均可通過合理設置參數(shù)實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染。通過規(guī)范操作流程、科學參數(shù)設定、細致維護保養(yǎng),使用者可以大幅提升轉(zhuǎn)染效率與實驗重復性。
          
          杭州實了個驗生物科技有限公司